ICS65.100.10 CCSG25 中华人民共和国国家标准 GB/T19567.3—2025 代替GB/T19567.3—2004 苏云金杆菌可湿性粉剂 Bacillusthuringiensiswettablepowder 2025-10-31发布 2026-05-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T19567.3—2004《苏云金芽孢杆菌可湿性粉剂》,与GB/T19567.3—2004相 比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———增加了苏云金杆菌可湿性粉剂的持久起泡性指标及其试验方法(见4.2、5.12); ———增加了苏云金杆菌可湿性粉剂低温稳定性指标及其试验方法(见4.2、5.13); ———增加了苏云金杆菌可湿性粉剂热储稳定性指标及其试验方法(见4.2、5.14); ———更改了苏云金杆菌可湿性粉剂毒力效价测定用试验虫的说明(见4.2,2004年版的3.2); ———更改了苏云金杆菌可湿性粉剂的pH值指标(见4.2,2004年版的3.2); ———更改了苏云金杆菌可湿性粉剂的润湿时间指标(见4.2,2004年版的3.2); ———增加了检验规则(见第6章); ———更改了苏云金杆菌可湿性粉剂的质量保证期的规定(见7.2,2004年版的6.5); ———更改了苏云金杆菌可湿性粉剂的毒力效价测定的仲裁法(见附录C,2004年版的附录B)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国农药标准化技术委员会(SAC/TC133)归口。 本文件起草单位:农业农村部农药检定所、武汉科诺生物科技股份有限公司、江苏东宝农化股份有 限公司、济南天邦化工有限公司、山西绿海农药科技有限公司、福建绿安生物农药有限公司、湖北省生物 农药工程研究中心、沈阳沈化院测试技术有限公司。 本文件主要起草人:廖先骏、刘莹、陈雅洁、吴进龙、王文卓、杨闻翰、金海燕、史晓利、丁绍武、王改霞、 钟刘伟、王月莹。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2004年首次发布; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T19567.3—2025 苏云金杆菌可湿性粉剂 1 范围 本文件规定了苏云金杆菌可湿性粉剂的技术要求、检验规则、验收和质量保证期以及标志、标签、包 装、储运,描述了苏云金杆菌可湿性粉剂的试验方法。 本文件适用于苏云金杆菌鲇泽亚种(B.t.a)和苏云金杆菌库斯塔克亚种(B.t.k)可湿性粉剂产品的 质量控制。 注:苏云金杆菌的其他名称、分类地位和形态学特征等描述见附录A。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T1600—2021 农药水分测定方法 GB/T1601 农药pH值的测定方法 GB/T1604 商品农药验收规则 GB/T1605—2001 商品农药采样方法 GB3796 农药包装通则 GB/T5451 农药可湿性粉剂润湿性测定方法 GB/T8170—2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T14825—2023 农药悬浮率测定方法 GB/T16150—1995 农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法 GB/T19136—2021 农药热储稳定性测定方法 GB/T28137 农药持久起泡性测定方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 毒素蛋白 toxinprotein 在芽孢形成时期产生的一种具有杀虫活性的伴孢晶体蛋白。 3.2 毒力效价 toxicitypotency 微生物对靶标有害生物的致死或抑制能力差异的生物学指标。 4 技术要求 4.1 外观 均匀的疏松粉末,不应有团块。 1GB/T19567.3—2025 4.2 技术指标 苏云金杆菌可湿性粉剂应符合表1要求。 表1 苏云金杆菌可湿性粉剂技术指标 项目指标 32000IU/mg规格 16000IU/mg规格 毒素蛋白质量分数/% ≥4.0 ≥2.0 毒力效价a/(IU/mg) ≥32000 ≥16000 pH值 4.0~7.5 水分/% ≤4.0 湿筛试验(通过75μm试验筛)/% ≥98 悬浮率/% ≥70 润湿时间/s ≤120 持久起泡性(1min后泡沫量)/mL ≤60 低温稳定性 冷储后,毒素蛋白质量分数、毒力效价仍应符合本文件的要求 热储稳定性b热储后,pH值、湿筛试验、润湿时间仍应符合本文件要求,热储前后 质量变化率应不大于1.0% a可选择棉铃虫、小菜蛾或甜菜夜蛾作为试验虫,并用H.a.代表棉铃虫(Helicoverpaarmigera),P.x.代表小菜 蛾(Plutellaxylostella)、S.e.代表甜菜夜蛾(Spodopteraexigua),试验结果分别表示为毒力效价(H.a.)、毒力 效价(P.x.)和毒力效价(S.e.)。 5 试验方法 警告:使用本文件的人员应有实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有的安全问题。使用者 有责任采取适当的安全和健康措施。 5.1 一般规定 本文件所用试剂和水在没有注明其他要求时,均指分析纯试剂和蒸馏水。 5.2 取样 按GB/T1605—2001中5.3.3进行。用随机数表法确定取样的包装件;最终取样量应不少于 200g。 5.3 鉴别试验 5.3.1 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE) 本鉴别试验可与毒素蛋白质量分数的测定同时进行。在相同的操作条件下,试样溶液与标样溶液 应具有相同的蛋白区带,由此证明产品中的毒素蛋白的相对分子质量为130000。 2GB/T19567.3—2025 5.3.2 生物测定法 采用形态学特征观察和分子生物学鉴定相结合的方式进行。 有效成分的特征见附录A。 5.4 外观 采用目测法测定。 5.5 毒素蛋白质量分数 5.5.1 方法提要 用碱性溶液处理苏云金杆菌可湿性粉剂伴孢晶体,使其降解为毒素蛋白,然后通过SDS-PAGE,依 据蛋白质相对分子质量的差异,使毒素蛋白与其他杂蛋白分离,之后用电泳凝胶成像系统扫描蛋白区带 面积,进行定量。 5.5.2 试剂和溶液 5.5.2.1 水。 5.5.2.2 标准硬水。 5.5.2.3 十二烷基硫酸钠。 5.5.2.4 三羟基甲基氨基甲烷。 5.5.2.5 浓盐酸。 5.5.2.6 氢氧化钠。 5.5.2.7 甘氨酸。 5.5.2.8 甘油。 5.5.2.9 巯基乙醇。 5.5.2.10 溴酚蓝。 5.5.2.11 考马斯亮蓝R-250。 5.5.2.12 甲醇。 5.5.2.13 冰乙酸。 5.5.2.14 无水乙醇。 5.5.2.15 0.55mol/L氢氧化钠溶液:在烧杯中量取100mL水,缓慢加入2.2g氢氧化钠,边加入边搅 拌溶解,待充分溶解后,放置室温,密闭保存备用。 5.5.2.16 1mol/L、pH6.8三羟基甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液:称取三羟基甲基氨基甲烷12.1g溶于水 中,用浓盐酸调至pH6.8,用水定容至100mL。 5.5.2.17 电泳缓冲液:称取三羟基甲基氨基甲烷3.0g,甘氨酸14.4g,十二烷基硫酸钠1g,用水溶解并 定容至1000mL。 5.5.2.18 3×样品稀释液:1mol/L、pH6.8三羟基甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液18.75mL,十二烷基硫酸 钠6g,甘油30mL,巯基乙醇15mL,溴酚蓝0.5g,用水定容至100mL。 5.5.2.19 染色液:称取考马斯亮蓝R-2501.0g,加入甲醇450mL,冰乙酸100mL,水450mL,溶解过 滤后使用。 5.5.2.20 脱色液:量取甲醇100mL,冰乙酸35mL,用水定容至1000mL。 5.5.2.21 漂洗液:量取无水乙醇30mL,冰乙酸10mL,水60mL,混合均匀后使用。 5.5.2.22 固定液:量取冰乙酸75mL,用水定容至1000mL,混合均匀后使用。 3GB/T19567.3—2025 5.5.2.23 毒素蛋白(相对分子质量为130000)标样且已知质量分数不低于9.0%。 5.5.3 仪器 5.5.3.1 电泳仪。 5.5.3.2 夹芯式垂直电泳槽(1.0mm凹形带槽橡胶模框)、凝胶板(1.0mm,15孔或10孔样品槽模具)。 5.5.3.3 电泳凝胶成像系统。 5.5.3.4 水浴锅。 5.5.3.5 可调移液器。 5.5.3.6 微量进样器。 5.5.3.7 离心机:20000r/min。 5.5.3.8 脱色摇床:90r/min。 5.5.4 测定步骤 5.5.4.1 试样处理 分别称取含5.5mg(精确至0.mg)毒素蛋白的标样和试样,置于10mL离心管中,准确加入5mL 水,充分混匀,移取0.5mL至1.5mL离心管中,加入0.55mol/L氢氧化钠溶液0.125mL(使氢氧化钠 溶液的最终浓度为0.1mol/L),摇匀,静置5min,再加入3×样品稀释液0.325mL,于沸水浴中煮 6min,冷却至室温,15000r/min离心5min,取上层清液,以备电泳上样,样品的折算的最终定容体积 为9.5mL。 5.5.4.2 SDS-PAGE分离毒素蛋白 5.5.4.2.1 制备8%~10%聚丙烯酰胺凝胶 采用不连续缓冲系统,制胶方法见附录B。 5.5.4.2.