ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T33123—2016 斜纹卷蛾检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofCtenopseustisobliquana(Walker) 2016-10-13发布 2017-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人:张京宣、魏晓棠、尼秀媚、白桦、衣维贤、粟智平、廖力、王建力。 ⅠGB/T33123—2016 斜纹卷蛾检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了斜纹卷蛾Ctenopseustisobliquana(Walker)的检测、饲养、标本制作和鉴定方法等。 本标准适用于斜纹卷蛾的检测、饲养和鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 SN/T2959 昆虫常规检疫规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 翅斑 speckle 由鳞片排列成的斑纹。 注:在翅基部的为基斑,翅中部的为中带,靠翅外缘前端的为端纹。 3.2 抱器瓣 valva 鳞翅目雄性外生殖器中两侧成对的由第九腹节演变而来的片状结构,大而显著。 3.3 抱器端 cucullus 鳞翅目雄性外生殖器中,抱器瓣的背面端部区域。 3.4 阴片 sterigma 鳞翅目雌性生殖系统中围绕交配孔周围的骨化结构,其中包括前阴片和后阴片。 3.5 背兜 tegumen 鳞翅目雄性外生殖器中形似屋脊状或头巾状结构,由第9腹节背板演变形成。 3.6 爪形突 uncus 背兜后端向下弯曲的片状或者钩状结构,发达,上面有毛。 3.7 颚形突 gnathos;scaphium;subscaphium 又称“下齿形突”,由背兜后缘发生的一对附器,位于爪形突之下,并可以向下向后围绕肛管,在其下 方中央会合。 1GB/T33123—2016 3.8 尾突 socius 在爪形突两侧基部下垂的凸出部分,大而明显。 3.9 囊导管 ductusbursae 鳞翅目雌性生殖系统中由阴门伸至交配囊的导管。 3.10 囊突 signum 鳞翅目雌性生殖系统中交配囊壁内高度骨化的刺状或小钩状构造,1个或数个。 4 斜纹卷蛾基本信息 中文名:斜纹卷蛾。 别名:棕头卷叶蛾。 学名:Ctenopseustisobliquana(Walker)。 英文名:obliquetortrix,light-brownapplemoth,applelaefroller。 异名:TerasobliquanaWalker,TerasspurcatanaWalker,SciaphilatranstriganaWalker, SciaphilaturbulentanaWalker,TortrixropeanaFelder&Rogenhofer,TortrixheranaFelder& Rogenhofer,CacoeciacharactanaMeyrick,CacoeciainanaMeyrick。 分类地位:属鳞翅目Lepidoptera,卷蛾科Tortricidae,黄卷蛾族Archipini,Ctenopseustis属。 斜纹卷蛾幼虫为杂食性害虫,主要以幼虫为害幼果和收获后的果实,也可以取食嫩梢、叶、茎和芽 等。主要以幼虫藏匿于果萼部位远距离转播扩散。其寄主、地理分布和生物学特性参见附录A。 该属中具有重要经济意义的种类除斜纹卷蛾C.obliquana(Walker)外,还主要有以下4种:C.ser- vanaWalker;C.heranaFelder&Rogenhofer;C.filicisDugdale;C.fraternaPhilpott,其区分特征参 见附录B和附录C。 5 方法原理 根据斜纹卷蛾的为害状、生物学特性和形态特征进行种类鉴定。在检疫现场仔细检查寄主植物,如 果发现幼虫或蛹,需送实验室饲养至成虫,利用体视显微镜进行观察鉴定。如果利用外部形态特征判定 其种类仍有疑问时,需进一步解剖雌雄成虫外生殖器并制成玻片标本,在生物显微镜下观察。 6 器材和试剂 6.1 器材 可封口塑料袋、标签、吸水纸、镊子、光照培养箱、小毛笔、指形管、纱布、冰箱、剪刀、刀片、昆虫针、滴 管、培养皿、载玻片、盖玻片、体视显微镜、生物显微镜。 6.2 试剂 霍氏封固剂(用阿拉伯树胶30g∶蒸馏水50mL∶水合氯醛200g∶甘油20mL配制而成)、幼虫 保存液[甘油∶福尔马林∶乙醇(体积比)=1∶1∶1配制而成]、树脂胶、无水乙醇、75%乙醇、85%乙 醇、95%乙醇、10%氢氧化钠或氢氧化钾、二甲苯、醋酸红、封片胶、蒸馏水。所用试剂为分析纯。 2GB/T33123—2016 7 检测与饲养 7.1 检测 根据斜纹卷蛾的为害状对寄主植物进行检查。观察寄主有无虫蛀孔与蛀屑或者有疑似虫道,重点 观察叶片、果实、花或者幼茎,如发现疑似幼虫、蛹粒,用刀片等工具进行剖检后,可疑虫体用指形管盛 装;同时,注意检查集装箱或者包装材料的缝隙处是否有可疑虫体。如发现上述幼虫或者蛹粒,用可封 口塑料袋装。上述管、袋均加标签,或编号,记录时间、地点、寄主、采集人等,带回实验室,按照SN/T2959 进行检测。 7.2 饲养 将幼虫连同寄主植物一起放入养虫笼内,蛹盛于指形管中,用纱布扎口,防止羽化成虫逃逸,放入光 照培养箱中20℃~25℃,在相对湿度70%~75%的条件下培养至成虫。 8 标本的制作 8.1 成虫标本 8.1.1 针插标本 将羽化后成虫冷冻杀死(可置于冰箱-20℃下1h左右),软化后在展翅板上展翅,制成针插标本。 干成虫标本需回软后制作。 8.1.2 浸泡标本 幼虫一般制作浸泡标本。将幼虫清洗干净后保存在幼虫保存液中。如果要备分子试验用,则可用 无水乙醇浸泡幼虫或成虫,并冷冻保存。 8.2 展翅标本的制作 用手术剪剪下成虫的翅膀,放入75%的乙醇中,用小毛笔小心刷去鳞片,再顺次放入75%、85%、 95%的乙醇和无水乙醇中脱水各约10min,然后放入醋酸红溶液中染色约5min,最后置于二甲苯中透 明,再放到载玻片上整形,滴一滴封片胶,盖上盖玻片,风干。 8.3 成虫外生殖器玻片标本 用昆虫针取下成虫腹部投入10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液中煮沸5min~10min(体视显微镜下 观察,以骨质部分保留深色、肌肉脂肪等溶解为佳);用滴管吸移至培养皿装薄层蒸馏水中浸洗;在体视 显微镜下(载物台为白色背景)用细针解剖,除去背腹板等物,仅剩第9背板及其附属构造(成虫外生殖 器);用针尖粘取第9背板及其附属构造至载玻片上霍氏封固剂滴中,体视显微镜下整姿,尽量使成虫外 生殖器构造在视野中为正面图像;封片;自然干燥或用烘箱45℃,24h烘干。 9 实验室鉴定 将成虫标本置于体视显微镜下,成虫外生殖器玻片标本置于生物显微镜下,观察是否符合以下鉴定 特征(参见附录D和附录B)。 3GB/T33123—2016 9.1 Ctenopseustis属成虫鉴别特征 下唇须长度约为复眼的2倍~4倍;雌雄均具单眼,头顶与额上部鳞片突起;成虫休息时翅平覆体 背;雄虫前翅具有前缘褶,后翅具有肘栉;雄虫外生殖去爪形突铲状,尾突棍棒状,抱器长方形,阳茎弯 曲,端部具有微刺,中部具有阳茎针。 9.2 斜纹卷蛾成虫的鉴别特征 9.2.1 雌虫 体长约8mm~12mm,翅展约20mm~28mm。触角粗壮,锯齿状,具有纤毛。触角5节~10节 基部具有黑色鳞片。下唇须前伸(参见附录D),长度变化大,下唇须约为复眼长的3.0倍。具有单眼; 头顶与额上部鳞片突起;胸、肩鳞片平覆体表。翅深褐色到浅褐色,翅面斑纹变异大,前翅有一斜纹从前 缘斜向后伸,雌虫的斜纹更加明显,成虫休息时翅平覆体背。翅脉:前翅M脉干和索脉退化;前翅外缘 M1、M2脉处略凹;R4和R5不共柄;R4脉止于前缘脉,R5止于外缘;R5与M1脉有时共柄;M1和M2 不共柄;R1由中室上缘中部发出,R2在中室三分之二处发出,CuA2约在中室下缘四分之三处发出。后 翅具有肘栉;R5和M1发自中室顶角;M2、M3和CuA1发自中室下角;CuA2发自中室下缘四分之三出 处。雌虫外生殖器:囊导管呈S状,与交配囊连接处膨大;管带长,变化大,一般超过囊导管长度的三分 之一;囊突、囊导管端片、管带骨化程度高,囊突爪状,顶端部具有明显的木塞状突起。 9.2.2 雄虫 体长约7mm~11mm,翅展约17mm~24mm。触角粗壮,锯齿状,具有纤毛。触角5节~10节 基部不具有黑色鳞片。下唇须前伸,长度变化大,下唇须约为复眼长的2.25倍~2.75倍。具有单眼;头 顶与额上部鳞片突起;胸、肩鳞片平覆体表。翅深褐色到浅褐色,翅面斑纹变异大,前翅有一斜纹从前缘 斜向后伸,雄虫的斜纹无雌虫明显,成虫休息时翅平覆体背。翅脉:同雌虫,雄虫前缘褶约为前翅长度的 一半。雄虫外生殖器:抱器长方形,抱器背基突锯齿状;爪形突匙状,具软毛;尾突棍棒状;颚形突臂细 长,末端合并呈平的铲状;阳茎基环近方形,前端中部凹陷,底部较宽;阳茎弯曲,端部具有微刺,中部具 有阳茎针,14条~22条;阳茎端膜基部圆形凸出,手指状。 9.3 卵 呈块状。初产时呈浅绿色,接近孵化时浅黄色。约0.7mm~