书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ／ 犜 ６４３７ — ２０１８ /G21 /G22 ＧＢ ／ Ｔ６４３７ — ２００２ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 　 /G29 /G2A /G2A /G2B /G2C 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆犺狅狊狆犺狅狉狌狊犻狀犳犲犲犱狊 — 犛狆犲犮狋狉狅狆犺狅狋狅犿犲狋狉狔 ２０１８  ０９  １７ /G2D /G2E ２０１９  ０４  ０１ /G2F /G30 /G27 /G28 /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 /G21 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A /G33 /G2F /G30 /G34 /G35 /G36 /G2D /G2E书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准代替 ＧＢ ／ Ｔ６４３７ — ２００２ 《 饲料中总磷的测定分光光度法 》。 本标准与 ＧＢ ／ Ｔ６４３７ — ２００２ 相比 ， 主要技术内容修改如下 ： ——— 删除范围中 “ 除磷酸盐外 ” 的内容 （ 见第 １ 章 ， ２００２ 年版的第 １ 章 ）； ——— 增加了检出限和定量限 （ 见第 １ 章 ）； ——— 修订了磷测定方法原理的表述 （ 见第 ３ 章 ， ２００２ 年版的第 ３ 章 ）； ——— 增加了磷标准贮备液保存期 （ 见 ４．４ ）； ——— 修改了采样和试样制备方法 （ 见第 ６ 章 ， ２００２ 年版的第 ６ 章 ）； ——— 删除干灰化法中 “ 不适用于含磷酸二氢钙 ［ Ｃａ （ Ｈ ２ ＰＯ ４ ） ２ ］ 的饲料 ” 的内容 （ 见 ７．１．１ ， ２００２ 年版的 ７．１．１ ）； ——— 修订了标准曲线的范围 ， 由原来的 “ ０ μ ｇ ／ ｍＬ ～ １６ μ ｇ ／ ｍＬ ” 改为 “ ０ μ ｇ ／ ｍＬ ～ １５ μ ｇ ／ ｍＬ ”（ 见 ７．２ ， ２００２ 年版的 ７．２ ）。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ７６ ） 提出并归口 。 本标准起草单位 ： 上海市兽药饲料检测所 。 本标准主要起草人 ： 商军 、 华贤辉 、 黄士新 、 陆淳 、 曹莹 、 田恺 、 张浩然 、 孙冰清 。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ６４３７ — １９９２ 、 ＧＢ ／ Ｔ６４３７ — ２００２ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ６４３７ — ２０１８ 饲料中总磷的测定 　 分光光度法 １ 　 范围 本标准规定了饲料中总磷含量测定的分光光度法 。 本标准适用于饲料原料及饲料产品中磷的测定 。 当取样量 ５ｇ ， 定容至 １００ｍＬ 时 ， 检出限为 ２０ｍｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 ６０ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６０１ 　 化学试剂 　 标准滴定溶液的制备 ＧＢ ／ Ｔ６０２ 　 化学试剂 　 杂质测定用标准溶液的制备 ＧＢ ／ Ｔ６０３ 　 化学试剂 　 试验方法中所用制剂及制品的制备 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＧＢ ／ Ｔ１４６９９．１ 　 饲料 　 采样 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 　 动物饲料试样的制备 ３ 　 原理 试样中的总磷经消解 ， 在酸性条件下与钒钼酸铵生成黄色的钒钼黄 ［（ ＮＨ ４ ） ３ ＰＯ ４ ＮＨ ４ ＶＯ ３ · １６ＭｏＯ ３ ］ 络合物 。 钒钼黄的吸光度值与总磷的浓度成正比 。 在波长 ４００ｎｍ 下测定试样溶液中钒钼黄的吸光度值 ， 与标准系列比较定量 。 ４ 　 试剂或材料 本标准所用试剂和水 ， 在没有注明其他要求时 ， 均指分析纯试剂和 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 中规定的三级水 。 试验中所用标准滴定溶液 、 杂质测定用标准溶液 、 制剂及制品 ， 在没有注明其他要求时 ， 均按 ＧＢ ／ Ｔ６０１ 、 ＧＢ ／ Ｔ６０２ 、 ＧＢ ／ Ｔ６０３ 的规定制备 。 试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时 ， 均指水溶液 。 ４ ． １ 　 硝酸 。 ４ ． ２ 　 高氯酸 。 ４ ． ３ 　 盐酸溶液 ： 盐酸 ＋ 水 ＝１＋１ （ 犞 １ ＋ 犞 ２ ）。 ４ ． ４ 　 磷标准贮备液 （ ５０ μ ｇ ／ ｍＬ ） 取 １０５℃ 干燥至恒重的磷酸二氢钾 ， 置干燥器中 ， 冷却后 ， 精密称取 ０．２１９５ｇ ， 溶解于水 ， 定量移入 １０００ｍＬ 容量瓶中 ， 加硝酸 ３ｍＬ ， 加水稀释至刻度 ， 摇匀 ， 即得 。 置聚乙烯瓶中 ４℃ 下可储存 １ 个月 。 ４ ． ５ 　 钒钼酸铵显色剂称取偏钒酸铵 １．２５ｇ ， 加水 ２００ｍＬ 加热溶解 ， 冷却后再加入 ２５０ｍＬ 硝酸 （ ４．１ ）， 另称取钼酸铵 ２５ｇ ， 加水 ４００ｍＬ 加热溶解 ， 在冷却的条件下 ， 将两种溶液混合 ， 用水稀释至 １０００ｍＬ ， 避光保存 ， 若生成沉淀 ， 则不能继续使用 。 １ 犌犅 ／ 犜 ６４３７ — ２０１８ ５ 　 仪器设备 ５ ． １ 　 分析天平 ： 感量 ０．０００１ｇ 。 ５ ． ２ 　 紫外  可见分光光度计 ： 带 １ｃｍ 比色皿 。 ５ ． ３ 　 高温炉 ： 可控温度在 ±２０℃ 。 ５ ． ４ 　 电热干燥箱 ： 可控温度在 ±２℃ 。 ５ ． ５ 　 可调温电炉 ： １０００Ｗ 。 ６ 　 试样的制备 按 ＧＢ ／ Ｔ１４６９９．１ 抽取有代表性的饲料样品 ， 用四分法缩减取约 ２００ｇ ， 按照 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 制备样品 ， 粉碎后过 ０．４２ｍｍ 孔径的分析筛 ， 混匀 ， 装入磨口瓶中 ， 备用 。 ７ 　 试验步骤 ７ ． １ 　 试样的前处理 ７ ． １ ． １ 　 干灰化法 称取试样 ２ｇ ～ ５ｇ ， 精确到 １ｍｇ ， 置于坩埚中 ， 在电炉上小心炭化 ， 再放入高温炉 ， 在 ５５０℃ 灼烧 ３ｈ （ 或测粗灰分继续进行 ）， 取出冷却 ， 加盐酸溶液 （ ４．３ ） １０ｍＬ 和硝酸 （ ４．１ ） 数滴 ， 小心煮沸约 １０ｍｉｎ ， 冷却后转入 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 加水稀释至刻度 ， 摇匀 ， 为试样溶液 。 ７ ． １ ． ２ 　 湿法消解法 称取试样 ０．５ｇ ～ ５ｇ ， 精确到 １ｍｇ ， 置于凯氏烧瓶中 ， 加入硝酸 （ ４．１ ） ３０ｍＬ ， 小心加热煮沸至黄烟逸尽 ， 稍冷 ， 加入高氯酸 （ ４．２ ） １０ｍＬ ， 继续加热至高氯酸冒白烟 （ 不得蒸干 ）， 溶液基本无色 ， 冷却 ， 加水 ３０ｍＬ ， 加热煮沸 ， 冷却后用水转入 １００ｍＬ 容量瓶中并稀释至刻度 ， 摇匀 ， 为试样溶液 。 ７ ． １ ． ３ 　 盐酸溶解法 （ 适用于微量元素预混料 ） 称取试样 ０．２ｇ ～ １ｇ ， 精确到 １ｍｇ ， 置于 １００ｍＬ 烧杯中 ， 缓缓加入盐酸溶液 （ ４．３ ） １０ｍＬ ， 使其全部溶解 ， 冷却后转入 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 加水稀释至刻度 ， 摇匀 ， 为试样溶液 。 ７ ． ２ 　 磷标准工作液的制备 准确移取磷标准贮备液 （ ４．４ ） ０ｍＬ 、 １ｍＬ 、 ２ｍＬ 、 ５ｍＬ 、 １０ｍＬ 、 １５ｍＬ 于 ５０ｍＬ 容量瓶中 （ 即相当于含磷量为 ０ μ ｇ 、 ５０ μ ｇ 、 １００ μ ｇ 、 ２５０ μ ｇ 、 ５００ μ ｇ 、 ７５０ μ ｇ ）， 于各容量瓶中分别加入钒钼酸铵显色剂 （ ４．５ ） １０ｍＬ ， 用水稀释至刻度 ， 摇匀 ， 常温下放置 １０ｍｉｎ 以上 ， 以 ０ｍＬ 磷标准溶液为参比 ， 用 １ｃｍ 比色皿 ， 在 ４００ｎｍ 波长下用分光光度计测各溶液的吸光度 。 以磷含量为横坐标 ， 吸光度为纵坐标 ， 绘制工作曲线 。 ７ ． ３ 　 试样的测定 准确移取试样溶液 １ｍＬ ～ １０ｍＬ （ 含磷量 ５０ μ ｇ ～ ７５０ μ ｇ ） 于 ５０ｍＬ 容量瓶中 ， 加入钒钼酸铵显色剂 （ ４．５ ） １０ｍＬ ， 用水稀释至刻度 ， 摇匀 ， 常温下放置 １０ｍｉｎ 以上 ， 用 １ｃｍ 比色皿 ， 在 ４００ｎｍ 波长下用分光光度计测定试样溶液的吸光度 ， 通过工作曲线上计算试样溶液的磷含量 。 若试样溶液磷含量超过磷 ２ 犌犅 ／ 犜 ６４３７ — ２０１８ 标准工作曲线范围 ， 应对试样溶液进行稀释 。 ８ 　 试验数据处理 ８ ． １ 　 结果计算 试样中磷的含量 狑 ， 以质量分数计 ， 数值以 ％ 表示 ， 结果按式 （ １ ） 计算 ： 狑 ＝ 犿 １ × 犞犿 × 犞 １ × １０ ６ × １００％ ……………………（ １ ） 　　 式中 ： 狑 　 ——— 试样中磷的含量 ； 犿 １ ——— 通过工作曲线计算出试样溶液中磷的含量 ， 单位为微克 （ μ ｇ ）； 犞 ——— 试样溶液的总体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犿 ——— 试样质量 ， 单位为克 （ ｇ ）； 犞 １ ——— 试样测定时移取试样溶液的体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； １０ ６ ——— 换算系数 。 ８ ． ２