ICS71.040 N04 中华人民共和国国家标准 GB/T32268—2015 十八烷基键合相(C18)高效液相色谱柱 性能测定方法 Methodofperformancetestingforoctadecylbonded(C18)highperformance liquidchromatography(HPLC)column 2015-12-10发布 2016-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出。 本标准由全国仪器分析测试标准化技术委员会(SAC/TC481)归口。 本标准负责起草单位:天津博纳艾杰尔科技有限公司。 本标准参加起草单位:中国分析测试协会、北京大学、中国科学院化学研究所、中国计量科学研究 院、中国食品药品检定研究院、北京有色金属研究总院、沃特世科技(上海)有限公司、大连依利特分析仪 器有限公司、北京金欧亚科技发展有限公司。 本标准主要起草人:王宛、汪群杰、赵羽、张学云、张庆合、刘国铨、刘虎威、胡昌勤、汪正范、蔡会霞、 汪若梅。 ⅠGB/T32268—2015 十八烷基键合相(C18)高效液相色谱柱 性能测定方法 1 范围 本标准规定了十八烷基键合相高效液相色谱柱(简称“C18HPLC柱”)性能的测定方法。 本标准适用于C18HPLC柱性能的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T9008 液相色谱法术语 柱色谱法和平面色谱法 GB/T32267 分析仪器性能测定术语 JJG705 液相色谱仪检定规程 3 术语和定义 GB/T9008和GB/T32267界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 十八烷基键合相(C18)高效液相色谱柱 octadecylbondedhighperformanceliquidchromatography column 装有键合十八烷基的固定相的高效液相色谱柱。 3.2 柱内径 columninternaldiameter 色谱柱柱管的内径。 3.3 疏水保留因子 retentionfactorofhydrophobicity αn 表征C18固定相的C18烷基链的相对数量的参数,与填料颗粒的比表面积和表面碳覆盖率有关。 3.4 疏水选择性因子 selectivityfactorofhydrophobicity αhp 表征C18固定相对被分离物质分子疏水基团的选择识别能力的参数,与填料颗粒的表面碳覆盖率 有关。 3.5 立体选择性因子 stericselectivityfactor αss 表征C18固定相对被分离物质分子形状的选择识别能力的参数,与填料颗粒表面的官能团键合度 1GB/T32268—2015 和碳覆盖率有关。 3.6 氢键容量因子 hydrogenbondingcapacityfactor αH 表征C18固定相的氢键作用的参数,与纯水中填料颗粒表面残留的游离硅羟基数量有关。 3.7 总离子交换容量因子 totalionexchangecapacityfactor αB 表征C18固定相在pH7.60的流动相中离子交换能力的参数,与填料颗粒表面的硅羟基数量及其 他离子交换位点的数量有关。 3.8 酸性环境中离子交换容量因子 ionexchangecapacityfactorinacidicsolution αA 表征C18固定相在pH2.60的流动相中离子交换能力的参数,与在pH2.60时填料颗粒表面的离 子交换位点的数量有关。 3.9 金属活性因子 metalactivityfactor αM 表征C18固定相表面杂质金属的含量及配位能力的参数。 3.10 酸性化合物选择性因子 selectivityfactorforacidiccompound αSA 表征C18固定相对酸性化合物和中性化合物的分离能力的参数。在实际测定中,其下标中可标示 出具体测定物质的名称,如αS苯酚。 3.11 碱性化合物选择性因子 selectivityfactorforbasiccompound αSB 表征C18固定相对碱性化合物和中性化合物的分离能力的参数。在实际测定中,其下标中可标示 出具体测定物质的名称,如αS阿米替林。 4 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂的级别应不低于分析纯级,水的级别符合GB/T6682一级水的规定。 4.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 4.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。 4.3 磷酸二氢钾(KH2PO4)。 4.4 磷酸(H3PO4)。 4.5 氢氧化钠(NaOH)。 4.6 氢氧化钾(KOH)。 4.7 三氟乙酸(CF3COOH)。 4.8 三乙胺(C6H15N)。 4.9 尿嘧啶(C4H4N2O2)。 4.10 正丁基苯(C10H14)。 2GB/T32268—2015 4.11 正戊基苯(C11H16)。 4.12 邻三联苯(C18H14)。 4.13 苯并菲(C18H12)。 4.14 咖啡因(C8H10N4O2)。 4.15 苯酚(C6H5OH)。 4.16 苯胺(C6H5NH2)。 4.17 2,3-二羟基萘(C10H8O2)。 4.18 2,7-二羟基萘(C10H8O2)。 4.19 阿米替林(C20H23N)。 4.20 尿苷(C9H12N2O6)。 4.21 氢氧化钠调节液 称取4.00g氢氧化钠,溶于10.0mL水中。 4.22 氢氧化钾调节液 称取5.60g氢氧化钾,溶于10.0mL水中。 4.23 磷酸盐缓冲液(pH2.60) 称取1.36g磷酸二氢钾,置于合适的烧杯中,溶解于480.0mL水,用浓磷酸调节pH值至2.60,然 后转移并定容于500.0mL的容量瓶中,得到pH2.60的磷酸二氢钾缓冲液。 4.24 磷酸盐缓冲液(pH5.80) 称取1.36g磷酸二氢钾,置于合适的烧杯中,溶解于480.0mL水,用氢氧化钾调节液(4.22)调节 pH值至5.80,然后转移并定容于500.0mL的容量瓶中,得到pH5.80的磷酸二氢钾缓冲液。 4.25 磷酸盐缓冲液(pH7.60) 称取1.36g磷酸二氢钾,置于合适的烧杯中,溶解于480.0mL水,用氢氧化钾调节液(4.22)调节 pH值至7.60,然后转移并定容于500.0mL的容量瓶中,得到pH7.60的磷酸二氢钾缓冲液。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪应符合JJG705的规定,并满足以下各项要求: a) 检测器 高效液相色谱仪配备紫外-可见光检测器,其波长范围覆盖190nm~400nm即可。流通池和 采集频率的设定办法为: 1) 当测试普通液相色谱柱时,检测器的流通池体积不大于15μL,采集频率不小于10Hz。 2) 当测试超高效液相色谱柱时,检测器的流通池体积不大于5μL,采集频率不小于20Hz。 注:超高效液相色谱柱指装填有基于亚2μm硅胶基质或亚3μm核壳式硅胶基质的固定相的液相色谱柱。此处所 述硅胶基质包括碳杂化硅胶基质。 b)柱温箱 高效液相色谱仪需配备柱温箱,其温度设定值最大允许误差为±2℃,温度稳定性为不大于 1℃/h。 c)连接管线 色谱柱需要通过材质为PEEK或者不锈钢的连接管线连接到进样器和检测器之间。色谱柱 和进样器或者检测器之间的连接管线的长度均不超过25cm。连接管线的内径尺寸根据色谱 柱的内径尺寸进行选择: 1) 当色谱柱的柱内径小于2.1mm时,连接管线的内径为0.13mm。 3GB/T32268—2015 2) 当色谱柱的柱内径大于或等于2.1mm且小于或等于4.6mm时,连接管线的内径为 0.18mm。 3) 当色谱柱的柱内径大于4.6mm且小于21.2mm时,连接管线的内径为0.25mm。 4) 当色谱柱的柱内径大于或等于21.2mm时,连接管线的内径为0.5mm。 5.2 分析天平 准确度级别为Ⅰ级,实际标尺分度值0.1mg。 5.3 移液器 量程分别为0.1mL~1.0mL和1.0mL~10.0mL。 5.4 量筒 规格为500.0mL。 5.5 容量瓶 规格分别为10.0mL、100.0mL和500.0mL。 5.6 pH计 精度为0.01。 6 条件 6.1 仪器工作条件 6.1.1 环境温度:15℃~30℃。 6.1.2 相对湿度:20%~80%。 6.1.3 供电电源:交流220V±22V,频率50Hz±0.5Hz。 6.1.4 室内应清洁无尘,具有良好的通风装置,无易燃、易爆和腐蚀性气体。 6.1.5 仪器应平稳地放在工作台上,周围无影响仪器使用的振动和电磁干扰,仪器接地良好。 6.2 试验准备条件 6.2.1 试验用计量仪器、仪表和玻璃器皿均应按有关规定,经计量检定单位检定合格并满足量程和精 度的要求。 6.2.2 在试验前将满足5.1要求的高效液相色谱仪调整至正常工作状态,按照各项性能指标测定所需 的液相色谱条件设定好仪器参数,配制好流动相。将选定好的C18HPLC柱通过连接管线正确地连接 在液相色谱仪的进样器和检测器之间。 6.2.3 启动高效液相色谱仪的泵,进行排气等操作。同时检查各管路接口,确保没有漏液的情况。以 至少10倍柱体积的流动相平衡色谱柱,待基线平稳后,可以进行测定工作。 7 性能指标的测定 7.1 总则 分别测定C18HPLC柱的