ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T28076—2011 三 叶斑潜蝇检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofLiriomyzatrifolii(Burgess) 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中国检验检疫科学院、中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国 山东出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫 局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中华人民共和国江西出入境检验检疫局、中华人民共和国 广西出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:陈乃中、吴佳教、魏晓棠、刘海军、刘忠善、张俊华、江丽辉、卢建、姜金林、 黄丽莉、冯贤。 ⅠGB/T28076—2011 三叶斑潜蝇检疫鉴定方法 1 范围 本标准明确了三叶斑潜蝇的检测、饲养、标本制作和室内鉴定等方法。 本标准适用于进出境植物检疫、国内植物检疫和大田防治工作中的三叶斑潜蝇的检测、饲养和 鉴定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 内顶鬃 innerverticals 单眼三角区后侧面2对鬃靠内的1对鬃。 2.2 外顶鬃 outerverticals 单眼三角区后侧面2对鬃靠外的1对鬃。 2.3 后顶鬃 postverticals 位于单眼三角区后方的1对鬃。 2.4 髭 vibrissae 位于口器上面颊下角部位最粗的1对鬃。 2.5 上眶鬃 upperorbitals 位于眼眶上半部的鬃。 2.6 下眶鬃 lowerorbitals 位于眼眶下半部的鬃。 2.7 眶毛 orbitalsetulae 着生于眼眶部位的细毛。 2.8 盾片 scutum 双翅目昆虫中胸节背板位于盾间沟和小盾沟之间的骨片。 2.9 中侧片 anepisternum 中胸节的上前方侧片。是位于背侧片与腹侧片之间、翅侧片之前的大型骨片。 2.10 腹侧片 katepisternum 中胸节的下前方侧片。是位于中侧片下方的一近似三角形的骨片。 1GB/T28076—2011 2.11 端阳体 distiphallus 雄成虫阳茎的端部构造,又称阳茎端。 3 三叶斑潜蝇基本信息 学名:Liriomyzatrifolii(Burgess,1880)。 异名:L.alliovoraFrick,1925。 俗名:Americanserpentineleafminer、serpentineleafminer和chrysanthemumleafminer。 属于双翅目Diptera,潜蝇科Agromyzidae,植潜蝇亚科Phytomyzinae,斑潜蝇属LiriomyzaMik。 斑潜蝇属在全世界已知共370余种,属内形态上与三叶斑潜蝇近似的重要多食性种类还有美洲斑 潜蝇L.sativaeBlanchard、南美斑潜蝇L.huidobrensis(Blanchard)和番茄斑潜蝇L.bryoniaeKalten- bach。 三叶斑潜蝇的其他信息参见附录A。 4 方法原理 根据三叶斑潜蝇的危害状,在检疫现场或发生疑似三叶斑潜蝇的田地,肉眼观察寄主叶片,取得幼 虫或蛹虫样,饲养获得成虫,解剖制作雄外生殖器标本,用显微镜观察,根据形态特征对种类进行判定。 5 器材和试剂 5.1 器材 可封口塑料袋、标签、培养皿、吸水纸、镊子、生物培养箱、小毛笔、指形管、纱布、冰箱、三角纸剪刀、 昆虫针、滴管、培养皿、载玻片、盖玻片、体视显微镜。 5.2 试剂 荷燕尔胶(用阿拉伯树胶30g∶蒸馏水50mL∶水合氯醛200g∶甘油20mL配方配制而成)、树脂 胶、无水乙醇、氢氧化钠或氢氧化钾、蒸馏水。 6 检测与饲养 6.1 检测 在检疫现场或发生疑似三叶斑潜蝇的田地,观察有关寄主植物叶片(参见附录A),如发现上表发 白、由细变粗、弯曲甚至缠绕的疑似虫道,观察虫道末尾有无半透明的幼虫,并进一步查找附近有无长椭 圆形长约2.0mm的黄褐色蛹粒。如发现疑似蛹粒,用指形管盛装;如发现上述幼虫,摘取叶片,用可封 口塑料袋装。上述管、袋均加标签,或编号,记录时间、地点、寄主、采集人等,带回实验室。 6.2 饲养 带虫叶片置于皿底铺有吸水纸的培养皿中,蛹盛于指形管中,用纱布扎口,防止羽化成虫逃逸,放入 生物培养箱中25℃~30℃下培养。成虫羽化24h后可将指形管置于冰箱-1℃下不短于1h将成虫 冷冻杀死。 2GB/T28076—2011 7 标本的制作准备 7.1 成虫标本 7.1.1 针插标本 成虫标本可制作为针插标本。其中,粘虫用的三角纸应用三角纸剪刀制作;可用荷燕尔胶或其他快 干的树脂胶作为粘虫胶;成虫翅向外方、头部露出、侧身粘在三角纸尖上;要有注明地点、寄主、羽化时间 等信息的标签。 7.1.2 浸泡标本 也可以用无水乙醇浸泡保存成虫标本。但如果要备分子试验用,则可用无水乙醇浸泡,并冷冻 保存。 7.2 雄外生殖器玻片标本 用昆虫针取下雄虫腹部(见附录B)投入5%氢氧化钠或氢氧化钾溶液中煮沸3min~5min(体视显 微镜下观察,以骨质部分保留深色、肌肉脂肪等溶解为佳);用滴管吸移至培养皿装薄层蒸馏水中浸洗; 在体视显微镜下(载物台为白色背景)用细针解剖,除去背腹板等物,仅剩第9背板及其附属构造(雄外 生殖器);用针尖粘取第9背板及其附属构造至载玻片上荷燕尔胶滴中,体视显微镜下整姿,尽量使雄外 生殖器构造在视野中为正面图像;封片;自然干燥或用烘箱45℃24h烘干。 8 实验室鉴定 将成虫标本置于体视显微镜下,雄外生殖器玻片标本置于显微镜下,观察是否符合以下鉴定特征 (见附录B和附录C)。 8.1 潜蝇科成虫的鉴别特征 体小或微小,长1.5mm~4.0mm。有髭,后顶鬃分歧,上眶鬃分歧,下眶鬃内向。翅C脉仅在Sc 脉端处折断,Sc脉端部退化为一褶痕或与R脉合并,R脉3分支直达翅缘。腹部扁平,雌第7节长而骨 化,不能伸缩。 8.2 植潜蝇亚科Phytomyzinae成虫的鉴别特征 Sc脉端部退化为一褶痕,独立于R1脉之基伸达前缘脉。 8.3 包括三叶斑潜蝇在内的具经济意义Liriomyzaspp.成虫鉴别特征 上额眶鬃2对,眶毛后倾;小盾片通常为黄色;翅C脉伸达M1+2脉端,它们终止于翅端附近,有第2 横脉。 8.4 三叶斑潜蝇的鉴别特征 8.4.1 成虫 8.4.1.1 头部 触角各节亮黄色;内、外顶鬃均着生于黄色区域,至少外顶鬃着生于黑黄交界处。 3GB/T28076—2011 8.4.1.2 胸部 盾片黑色无光泽,带灰白色绒毛被(侧光照射可见);小盾片鲜黄色;中侧片下缘具黑斑,腹侧片大部 分黑色;翅M3+4脉末段长是次末段的约3倍;足基节黄色,腿节大部分黄色,有时有淡褐色条纹,胫节、 跗节暗褐色。 8.4.1.3 雄外生殖器 阳茎端阳体基半部分明显凸起,中间部位缢缩明显;柄部(中阳体)长,长度接近端阳体长度。 8.4.2 卵 白色,长椭圆形,长约0.25mm。 8.4.3 幼虫和蛹 幼虫3龄,初产幼虫长约0.5mm,老熟幼虫长约3.0mm,略呈蛆形。蛹长椭圆形,长约2.0mm, 腹面扁平,有突出的前、后气门,后气门有3个指状突。 9 结果判定 以8.1、8.2、8.3、8.4.1为主要依据,8.4.3和附录C可作参考,符合8.4.1.1和8.4.1.2的可初步 判定为三叶斑潜蝇,且符合8.4.1.3的可判定为三叶斑潜蝇。 10 标本保存 经过鉴定的三叶斑潜蝇标本应永久保存,并加注明时间、地点、寄主、采集人等信息的标签。 4GB/T28076—2011 附 录 A (资料性附录) 三叶斑潜蝇其他信息 A.1 地理分布 韩国、日本、菲律宾、印度、塞浦路斯、以色列、黎巴嫩、土耳其、也门、奥地利、比利时、保加利亚、克罗 地亚、捷克、丹麦、芬兰、法国、德国、匈牙利、冰岛、意大利、马耳他、荷兰、挪威、波兰、葡萄牙、罗马尼亚、 俄罗斯、斯洛伐克、斯洛文尼亚、西班牙、瑞典、瑞士、英国、南斯拉夫、贝宁、象牙海岸、埃及、埃塞俄比亚、 几内亚、肯尼亚、马达加斯加、毛里求斯、马约特岛、尼日利亚、留尼汪、塞内加尔、南非、苏丹、坦桑尼亚、 突尼斯、赞比亚、津巴布韦、加拿大、美国、巴哈马、巴巴多斯、百慕大、哥斯达黎加、古巴、多米尼加共和 国、瓜德罗普、危地马拉、马提尼克岛、特立尼达和多巴哥、巴西、哥伦比亚、法属圭亚那、圭亚那、秘鲁、委 内瑞拉、美属萨摩亚、密克罗尼西亚、关岛、北马里亚纳群岛、萨摩亚、汤加(其中有的国家或地区声称已 根除)。 我国台湾和大陆局部也有发生。大陆实施官方控制。 A.2 寄主植物 该虫为害包括重要花卉、果、蔬、棉和牧草等在内的20余科植物。重要的寄主作物包括菊花、扶朗 花、大丽花、百日菊、石竹花、丝石竹花、黄瓜、南瓜、甜瓜、西瓜、旱芹、番茄、辣椒、马铃薯、豌豆、菜豆、豇 豆、甜菜、菠菜、蒜、韭、洋葱、青菜、白菜、莴苣、苜蓿和棉等。其中菊科、茄科、葫芦科和旱芹是三叶斑潜 蝇的嗜食寄主。 A.3 生物学及传播途径 产卵于寄主叶片表皮下,幼虫孵出后即潜食叶肉,主要危害上表皮下的栅栏组织,叶面上表可见弯 曲缠绕的虫道,幼虫老熟后弹出,在土中或叶片上化蛹。成虫取食叶片汁液,交配、产卵。 卵、幼虫和蛹等随寄主叶片传带是主要传播途径。 A.4 三叶斑潜蝇及其相关种类的危害状 寄主植物叶片上弯曲虫道及取食刻点是斑潜蝇可能