中华人民共和国国家标准 GB5009.158—2016 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.158—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.158—2003《蔬菜中维生素K1的测定》和GB5413.10—2010《食品安全国 家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素K1的测定》。 本标准与GB/T5009.158—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定”; ———增加了高效液相色谱-荧光检测法; ———增加了液相色谱-串联质谱法; ———删除了高效液相色谱-紫外检测法。GB5009.158—2016 1 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定 1 范围 本标准规定了食品中维生素K1的测定方法。 本标准第一法为高效液相色谱-荧光检测法,第二法为液相色谱-串联质谱法,均适用于各类配方食 品、植物油、水果和蔬菜中维生素K1的测定。 第一法 高效液相色谱-荧光检测法 2 原理 婴幼儿食品和乳品、植物油等样品经脂肪酶和淀粉酶酶解,正己烷提取样品中的维生素K1后,用 C18液相色谱柱将维生素K1与其他杂质分离,锌柱柱后还原,荧光检测器检测,外标法定量。 水果、蔬菜等低脂性植物样品,用异丙醇和正己烷提取其中的维生素K1,经中性氧化铝柱净化,去 除叶绿素等干扰物质。用C18液相色谱柱将维生素K1与其他杂质分离,锌柱柱后还原,荧光检测器检 测,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 无水乙醇(CH3CH2OH)。 3.1.2 碳酸钾(K2CO3)。 3.1.3 无水硫酸钠(Na2SO4)。 3.1.4 异丙醇(C3H8O)。 3.1.5 正己烷(C6H14)。 3.1.6 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.7 四氢呋喃(C4H8O):色谱纯。 3.1.8 乙酸乙酯(C4H8O2)。 3.1.9 冰乙酸(CH3COOH):色谱纯。 3.1.10 氯化锌(ZnCl2):色谱纯。 3.1.11 无水乙酸钠(CH3COONa)。 3.1.12 氢氧化钾(KOH)。 3.1.13 脂肪酶:酶活力≥700U/mg。 3.1.14 淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。 3.1.15 锌粉:粒径50μm~70μm。GB5009.158—2016 2 3.2 试剂配制 3.2.1 40%氢氧化钾溶液:称取20g氢氧化钾于100mL烧杯中,用20mL水溶解,冷却后,加水至 50mL,储存于聚乙烯瓶中。 3.2.2 磷酸盐缓冲液(pH8.0):溶解54.0g磷酸二氢钾于300mL水中,用40%氢氧化钾溶液调节pH 至8.0,加水至500mL。 3.2.3 正己烷-乙酸乙酯混合液(90+10):量取90mL正己烷,加入10mL乙酸乙酯,混匀。 3.2.4 流动相:量取甲醇900mL,四氢呋喃100mL,冰乙酸0.3mL,混匀后,加入氯化锌1.5g,无水乙 酸钠0.5g,超声溶解后,用0.22μm有机系滤膜过滤。 3.3 标准品 维生素K1(C31H46O2,CAS号:84-80-0):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 维生素K1标准贮备溶液(1mg/mL):准确称取50mg(精确至0.1mg)维生素K1标准品于50 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。将溶液转移至棕色玻璃容器中,在-20℃下避光保存,保存 期2个月。标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参照附录A。 3.4.2 维生素K1标准中间液(100μg/mL):准确吸取标准贮备溶液10.00mL于100mL容量瓶中,加 甲醇至刻度,摇匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中,在-20℃下避光保存,保存期2个月。 3.4.3 维生素K1标准使用液(1.00μg/mL):准确吸取标准中间液1.00mL于100mL容量瓶中,加甲 醇至刻度,摇匀。 3.4.4 标准系列工作溶液:分别准确吸取维生素K1标准使用液0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、 2.00mL、4.00mL于10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,维生素K1标准系列工作溶液浓度分别为 10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL。 3.5 材料 3.5.1 中性氧化铝:粒径50μm~150μm。 3.5.2 中性氧化铝柱:2g/6mL,填料中含10%水,可直接购买商品柱,也可自行装填。 注:中性氧化铝柱装填方法: a) 填料处理:取200g中性氧化铝于500mL的广口瓶中,于150℃干燥箱中烘烤2h,加盖后于干燥器中冷 却至室温,缓慢加入20mL纯水,边加边摇,加完后加上瓶盖,放入80℃烘箱中3min~5min,取出后,剧 烈振摇,直至瓶内氧化铝自由流动,无结块,置于干燥器中冷却30min,备用。 b) 层析柱装填:取6mL的针筒式柱套,加入筛板,称取2.00g上述经脱活化处理的填料,再加入一块筛板, 用装填工具压紧。 3.5.3 锌柱:柱长50mm,内径4.6mm,锌柱可直接购买商品柱,也可自行装填。 注: a) 锌柱填装方法:将锌粉密集装入不锈钢材质的柱套(柱长50mm,内径4.6mm)中。装柱时,应连续少量多 次将锌粉装入柱中,边装边轻轻拍打,以使装入的锌粉紧密。 b) 锌柱接入仪器前,须将液相色谱仪所用管路中的水排干。 3.5.4 微孔滤头:带0.22μm有机系微孔滤膜。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪:带荧光检测器。