ICS 11.020 C 50 DB61 陕 西 省 地 方 标 准 DB 61/ T 1001.4—2015 保健用品微生物限度检查 第 4 部分： 金黄色葡萄球菌检验 Microbial limit examination for healthcare supplies Part4: Tests for staphylococcus aureus 2015 - 12 - 29 发布 陕西省质量技术监督局 2016 - 03 - 01 实施 发 布 DB61/ T 1001.4—2015 目 次 前言 ................................................................................ II  1 范围 .............................................................................. 1  2 规范性引用文件 .................................................................... 1  3 术语和定义 ........................................................................ 1  4 设备和材料 ........................................................................ 1  5 培养基和试剂 ...................................................................... 2  6 操作步骤 .......................................................................... 3  7 判定和报告 ........................................................................ 4  表1 金黄色葡萄球菌菌落形态特征 ...................................................... 3  I DB61/ T 1001.4—2015 前 言 DB61/T 1001《保健用品微生物限度检查》分为以下5个部分： ——第1部分：总则； ——第2部分：菌落总数测定； ——第3部分：铜绿假单胞菌检验； ——第4部分：金黄色葡萄球菌检验； ——第5部分：霉菌和酵母菌数测定。 本部分为DB61/T 1001的第4部分。 DB61/T 998《保健用品安全性评价指导原则及试验方法》与DB61/T 999《保健用品功能学评价指导 原则及试验要求》、DB61/T 1000《保健用品产品标准编写规范》、DB61/T 1001《保健用品微生物限度 检查》共同构成了陕西省保健用品系列地方标准。 下面列出了这些地方标准的结构： a) DB61/T 998《保健用品安全性评价指导原则及试验方法》分为以下 6 个部分： 1) 第 1 部分：安全性评价指导原则； 2) 第 2 部分：皮肤急性毒性试验； 3) 第 3 部分：皮肤长期毒性试验； 4) 第 4 部分：皮肤刺激性试验； 5) 第 5 部分：皮肤过敏性试验； 6) 第 6 部分：眼部刺激性试验。 b) DB61/T 999《保健用品功能学评价指导原则及试验要求》分为以下 16 个部分： 1) 第 1 部分：总则； 2) 第 2 部分：改善微循环类功能学评价动物试验； 3) 第 3 部分：改善微循环类功能学评价人体试验； 4) 第 4 部分：乳房保健类功能学评价动物试验； 5) 第 5 部分：乳房保健类功能学评价人体试验； 6) 第 6 部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价动物试验； 7) 第 7 部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价人体试验； 8) 第 8 部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价动物试验； 9) 第 9 部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价人体试验； 10) 第 10 部分：皮肤瘙痒类功能学评价动物试验； 11) 第 11 部分：皮肤瘙痒类功能学评价人体试验； 12) 第 12 部分：妇女卫生保健类功能学评价动物试验； 13) 第 13 部分：妇女卫生保健类功能学评价人体试验； 14) 第 14 部分：眼部保健类功能学评价人体试验； 15) 第 15 部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价动物试验； 16) 第 16 部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价人体试验。 c) DB61/T 1000《保健用品产品标准编写规范》分为以下 8 个部分： 1) 第 1 部分：总则； II DB61/ T 1001.4—2015 2) 第 2 部分：保健贴类产品标准编写规范； 3) 第 3 部分：眼贴类产品标准编写规范； 4) 第 4 部分：含药芯类产品标准编写规范； 5) 第 5 部分：喷涂类产品标准编写规范； 6) 第 6 部分：清洗液类产品标准编写规范； 7) 第 7 部分：器具类产品标准编写规范； 8) 第 8 部分：功能服装类产品标准编写规范。 本部分根据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本部分由陕西省食品药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：陕西省食品药品监督管理局、陕西省质量技术监督局。 本部分主要起草人：杨晓莉、乔蓉霞、李伟、张扬。 本部分由陕西省食品药品监督管理局负责解释。 本部分首次发布。 联系信息如下： 单位：陕西省食品药品监督管理局 电话：029-62288000 地址：西安市高新六路56号 邮编：710065 III DB61/ T 1001.4—2015 保健用品微生物限度检查 第 4 部分：金黄色葡萄球菌检验 1 范围 DB61/T 1001的本部分规定了保健用品中金黄色葡萄球菌的检验方法。 本部分适用于陕西省保健用品中金黄色葡萄球菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB61/T 1001.1-2015 保健用品微生物限度检查 第 1 部分：总则 DB61/T 1001.3-2015 保健用品微生物限度检查 第 3 部分：铜绿假单胞菌检验 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 金黄色葡萄球菌 staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳 性。该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。 4 设备和材料 对保健用品进行金黄色葡萄球菌检验时应具备以下设备和材料，并应符合其规定： a) 恒温培养箱：温度应控制在 42℃±1℃、36℃±1℃； b) 恒温水浴箱：温度应控制在 36℃±1℃； c) 冰箱：温度应控制在 0℃～4℃； d) 高压灭菌锅； e) 显微镜：10×～100×； f) 电子天平：感量为 0.1g； g) 电磁炉； h) 振荡器或均质器； i) 灭菌吸管：容量为 1mL（具 0.01mL 刻度）、10 mL（具 0.1mL 刻度）； j) 试管：10 mm×100 mm、18 mm×180 mm； k) 丝口瓶或锥形瓶：容量为 300mL、500mL； l) 培养皿：直径为 90mm； m) 接种环和接种针； n) 载玻片； 1 DB61/ T 1001.4—2015 o) pH 计或精密 pH 试纸。 5 培养基和试剂 5.1 无菌生理盐水 无菌生理盐水应符合DB61/T 1001.1-2015中3.6.3规定的要求。 5.2 SCDLP 液体培养基 SCDLP液体培养基应符合DB61/T 1001.3-2015中5.2规定的要求。 5.3 7.5％氯化钠肉汤制备 5.3.1 a) b) c) d) 7.5％氯化钠肉汤制备材料的种类和量应符合以下要求： 蛋白胨：10g； 牛肉膏：3g； 氯化钠：75g； 蒸馏水：1000mL。 5.3.2 7.5％氯化钠肉汤的制备方法应为：将上述成份加热溶解，冷却至 25℃±1℃，调节 pH 值至 7.4， 分装，121℃灭菌 20min 后，冷却至 25℃左右使用。 5.4 Baird-Parker 平板制备 5.4.1 a) b) c) d) e) f) g) h) 5.4.2 Baird-Parker 平板制备材料的种类和量应符合以下要求： 胰蛋白胨：10g； 牛肉膏：5g； 酵母浸膏：1g； 丙酮酸钠：10g； 甘氨酸：12g； 氯化锂（LiCl·6H2O）：5g； 琼脂：20g； 蒸馏水：950mL。 应按照以下步骤制备 Baird-Parker 平板： a) 首先，应将 50mL 的 30%卵黄盐水与 10mL 的 1%亚碲酸钾溶液混合，制得卵黄亚碲酸钾增菌剂， 并将其保存于冰箱内； b) 然后，将 5.4.1 中的各成份加入蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，冷却至 25℃±1℃，调节 pH 值至 7.0±0.2。分装为每瓶 95mL，121℃灭菌 15min。临用时加热溶化，冷却至 50℃，每 95mL 加入 5mL 卵黄亚碲酸钾增菌剂，摇匀后制成平板备用。使用前在冰箱贮存不得超过 48h。 5.5 血琼脂培养基制备 应取100mL营养琼脂、10mL脱纤维羊血（或兔血），将灭菌后的营养琼脂加热融化，冷却至50℃左 右以无菌操作加入脱纤维羊血（或兔血），摇匀，制成平板备用。 5.6 2 甘露醇发酵培养基制备 DB61/ T 1001.4—2015 5.6.1 甘露醇发酵培养基制备材料的种类和量应符合以下要求： a) b) c) d) e) f) 蛋白胨：10g； 氯化钠：5g； 牛肉膏：5g； 甘露醇：10g； 0.2％麝香草酚蓝溶液：12mL； 蒸馏水：1000mL。 5.6.2 甘露醇发酵培养基的制备方法应为：将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，冷 却至 25℃±1℃，调节 pH 值至 7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装于试管内，115℃灭菌 20min 后 备用。 5.7 兔（人）血浆制备 应取一定量3.8％柠檬酸钠溶液，经121℃高压灭菌15min后，加入4倍体积的兔（人）全血，混匀静 置（或以3000r/min离心30min）使其血液