ICS 11.020 C 50 DB61 陕 西 省 地 方 标 准 DB 61/ T 999.4—2015 保健用品功能学评价指导原则及试验要求 第 4 部分：乳房保健类功能学评价动物试验 Guidelines and test requirements for functional evaluation of healthcare supplies Part 4: Animal tests for functional evaluation on breast healthcare supplies 2015 - 12 - 29 发布 陕西省质量技术监督局 2016 - 03 - 01 实施 发 布 DB61/T 999.4—2015 目 次 前言 ................................................................................ II  1 范围 .............................................................................. 1  2 术语和定义 ........................................................................ 1  3 试验项目 .......................................................................... 1  4 结果判定 .......................................................................... 2  5 注意事项 .......................................................................... 2  I DB61/T 999.4—2015 前 言 DB61/T 999《保健用品功能学评价指导原则及试验要求》分为以下16个部分： ——第1部分：总则； ——第2部分：改善微循环类功能学评价动物试验； ——第3部分：改善微循环类功能学评价人体试验； ——第4部分：乳房保健类功能学评价动物试验； ——第5部分：乳房保健类功能学评价人体试验； ——第6部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价动物试验； ——第7部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价人体试验； ——第8部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价动物试验； ——第9部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价人体试验； ——第10部分：皮肤瘙痒类功能学评价动物试验； ——第11部分：皮肤瘙痒类功能学评价人体试验； ——第12部分：妇女卫生保健类功能学评价动物试验； ——第13部分：妇女卫生保健类功能学评价人体试验； ——第14部分：眼部保健类功能学评价人体试验； ——第15部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价动物试验； ——第16部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价人体试验。 本部分为DB61/T 999的第4部分。 DB61/T 998《保健用品安全性评价指导原则及试验方法》与DB61/T 999《保健用品功能学评价指导 原则及试验要求》、DB61/T 1000《保健用品产品标准编写规范》、DB61/T 1001《保健用品微生物限度 检查》共同构成了陕西省保健用品系列地方标准。 下面列出了这些地方标准的结构： a) DB61/T 998《保健用品安全性评价指导原则及试验方法》分为以下 6 个部分： 1) 第 1 部分：安全性评价指导原则； 2) 第 2 部分：皮肤急性毒性试验； 3) 第 3 部分：皮肤长期毒性试验； 4) 第 4 部分：皮肤刺激性试验； 5) 第 5 部分：皮肤过敏性试验； 6) 第 6 部分：眼部刺激性试验。 b) DB61/T 1000《保健用品产品标准编写规范》分为以下 8 个部分： 1) 第 1 部分：总则； 2) 第 2 部分：保健贴类产品标准编写规范； 3) 第 3 部分：眼贴类产品标准编写规范； 4) 第 4 部分：含药芯类产品标准编写规范； 5) 第 5 部分：喷涂类产品标准编写规范； 6) 第 6 部分：清洗液类产品标准编写规范； 7) 第 7 部分：器具类产品标准编写规范； II DB61/T 999.4—2015 8) 第 8 部分：功能服装类产品标准编写规范。 c) DB61/T 1001《保健用品微生物限度检查》分为以下 5 个部分： 1) 第 1 部分：总则； 2) 第 2 部分：菌落总数测定； 3) 第 3 部分：铜绿假单胞菌检验； 4) 第 4 部分：金黄色葡萄球菌检验； 5) 第 5 部分：霉菌和酵母菌数测定。 本部分根据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本部分由陕西省食品药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：陕西省食品药品监督管理局、陕西省质量技术监督局。 本部分主要起草人：曹永孝、米燕妮、李伟、张扬。 本部分由陕西省食品药品监督管理局负责解释。 本部分首次发布。 联系信息如下： 单位：陕西省食品药品监督管理局 电话：029-62288000 地址：西安市高新六路56号 邮编：710065 III DB61/T 999.4—2015 保健用品功能学评价指导原则及试验要求 第 4 部分：乳房保健类功能学评价动物试验 1 范围 DB61/T 999的本部分规定了乳房保健类保健用品功能学评价动物试验的试验项目、结果判定和注意 事项。 本部分适用于陕西省乳房保健类保健用品功能学评价的动物试验。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 乳腺 mamma 是乳房的结构单位和功能单位，分为多个腺叶。其中，腺叶分成许多腺小叶；腺小叶是乳腺泌乳的 基本单位，由小乳管和腺泡组成。 2.2 乳腺增生 galactophore hyperplasia 是乳腺实质的良性增生、小叶结构退行性变及进行性结缔组织生长。乳管增生形成囊肿伴扩张，小 叶实质增生发生于乳管及腺泡上皮。 3 试验项目 3.1 乳腺增生模型 3.1.1 试验方法 应采用雌二醇联合黄体酮，序贯给药建立乳腺增生模型。 3.1.2 试验指标 本试验的指标应包括： a) 大体指标：乳头的直径和高度、乳腺的体积和质量； b) 病理检查指标：乳腺导管数目、导管腔直径或小叶腺泡数、腺泡腔直径和小叶数； c) 血液流变指标：全血黏度、血浆黏度和血沉； d) 乳腺上皮细胞凋亡指数：应采用细胞凋亡试剂盒法，计数 5 个视野的细胞数，计算细胞凋亡指 数。其值应按以下公式计算：细胞凋亡指数＝凋亡细胞数/细胞总数×100%； e) 脏器指数：子宫、卵巢、胸腺和脾脏指数。各脏器指数均应按照以下计算公式进行计算，即为： 脏器指数=脏器质量/体质量×100%。 3.2 3.2.1 乳腺上皮细胞 试验方法 1 DB61/T 999.4—2015 取妊娠期小鼠乳腺组织，用胰酶胶原酶二步消化法获得乳腺上皮细胞，传代培养。在培养基中加入 表皮生长因子、胰岛素和氢化可地松维持乳腺上皮细胞生存，加入Heregulin-α促进乳腺上皮细胞生长 和分泌。 3.2.2 试验指标 本试验的试验指标应为： a) 细胞凋亡指数：应采用细胞凋亡试剂盒进行染色，在荧光显微镜下观察。每个样品计数 200 个细胞，计算细胞凋亡指数； b) 上皮细胞活性：应采用噻唑蓝比色法分析细胞数量和蛋白量； c) 乳糖含量。 3.3 镇痛 应采用小鼠扭体法，以扭体次数为指标评价受试品的镇痛功能。 3.4 抗炎 3.4.1 伊文思蓝法 小鼠腹腔内注射稀醋酸溶液，刺激腹腔，增加毛细血管通透性。尾静脉注射伊文思蓝后，测定腹腔 渗出液中伊文思蓝的吸光度，评价受试品的抗炎功能。 3.4.2 白细胞计数法 大鼠胸腔内注射角叉菜胶混悬液，引起渗出和白细胞游走，测定胸腔渗出液中的白细胞计数，评价 受试品的抗炎功能。 3.4.3 足跖容积测量法 大鼠后肢足跖皮下注射角叉菜胶混悬液以致炎，于致炎前、后分别测定足跖容积，计算肿胀率和抑 制率，评价受试品的抗炎功能。其中： a) 肿胀率应按照以下公式进行计算： 肿胀率=（致炎后足跖容积-致炎前足跖容积）/致炎前足跖容积×100%； b) 抑制率应按照以下公式进行计算： 抑制率=（对照组平均肿胀率-受试组平均肿胀率）/对照组平均肿胀率×100%。 4 结果判定 若试验结果满足以下条件，则应判定该受试品具有乳房保健功能： a) 在3.1规定的指标中至少3个有效或在3.2规定的指标中至少2个有效； b) 3.3或3.4规定的指标有效； c) 受试品组与对照组的试验结果相比较具有显著性差异（有统计学意义），认为受试品有效。 5 注意事项 判定试验的有效性时应注意： 2 DB61/T 999.4—2015 a) 3.1.2a）中的指标为有效时，乳腺增生模型试验结果方可能有效； b) 评价受试品的抗炎功能时，3.4 规定的方法中至少应有一种有效。 _________________________________ 3