ICS 11.020 C 50 DB61 陕 西 省 地 方 标 准 DB 61/ T 1001.5—2015 保健用品微生物限度检查 第 5 部分： 霉菌和酵母菌数测定 Microbial limit examination for healthcare supplies Part 5：Tests for mycete and saccharomycete 2015-12-29 发布 陕西省质量技术监督局 2016-03-01 实施 发 布 DB61/T 1001.5—2015 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 设备和材料 ........................................................................ 1 4 培养基和试剂 ...................................................................... 1 5 操作步骤 .......................................................................... 2 6 结果和报告 ........................................................................ 2 I DB61/T 1001.5—2015 前 言 DB61/T 1001《保健用品微生物限度检查》分为以下5个部分： ——第1部分：总则； ——第2部分：菌落总数测定； ——第3部分：铜绿假单胞菌检验； ——第4部分：金黄色葡萄球菌检验； ——第5部分：霉菌和酵母菌数测定。 本部分为DB61/T 1001的第5部分。 DB61/T 998《保健用品安全性评价指导原则及试验方法》与DB61/T 999《保健用品功能学评价指导 原则及试验要求》、DB61/T 1000《保健用品产品标准编写规范》、DB61/T 1001《保健用品微生物限度 检查》共同构成了陕西省保健用品系列地方标准。 下面列出了这些地方标准的结构： a) DB61/T 998《保健用品安全性评价指导原则及试验方法》分为以下 6 个部分： 1) 第 1 部分：安全性评价指导原则； 2) 第 2 部分：皮肤急性毒性试验； 3) 第 3 部分：皮肤长期毒性试验； 4) 第 4 部分：皮肤刺激性试验； 5) 第 5 部分：皮肤过敏性试验； 6) 第 6 部分：眼部刺激性试验。 b) DB61/T 999《保健用品功能学评价指导原则及试验要求》分为以下 16 个部分： 1) 第 1 部分：总则； 2) 第 2 部分：改善微循环类功能学评价动物试验； 3) 第 3 部分：改善微循环类功能学评价人体试验； 4) 第 4 部分：乳房保健类功能学评价动物试验； 5) 第 5 部分：乳房保健类功能学评价人体试验； 6) 第 6 部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价动物试验； 7) 第 7 部分：胃肠功能保健-助消化类功能学评价人体试验； 8) 第 8 部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价动物试验； 9) 第 9 部分：胃肠功能保健-通便类功能学评价人体试验； 10) 第 10 部分：皮肤瘙痒类功能学评价动物试验； 11) 第 11 部分：皮肤瘙痒类功能学评价人体试验； 12) 第 12 部分：妇女卫生保健类功能学评价动物试验； 13) 第 13 部分：妇女卫生保健类功能学评价人体试验； 14) 第 14 部分：眼部保健类功能学评价人体试验； 15) 第 15 部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价动物试验； 16) 第 16 部分：改善睡眠、醒脑通窍保健类功能学评价人体试验。 c) DB61/T 1000《保健用品产品标准编写规范》分为以下 8 个部分： 1) 第 1 部分：总则； 2) 第 2 部分：保健贴类产品标准编写规范； II DB61/T 1001.5—2015 3) 第 3 部分：眼贴类产品标准编写规范； 4) 第 4 部分：含药芯类产品标准编写规范； 5) 第 5 部分：喷涂类产品标准编写规范； 6) 第 6 部分：清洗液类产品标准编写规范； 7) 第 7 部分：器具类产品标准编写规范； 8) 第 8 部分：功能服装类产品标准编写规范。 本部分根据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本部分由陕西省食品药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：陕西省食品药品监督管理局、陕西省质量技术监督局。 本部分主要起草人：杨晓莉、乔蓉霞、李伟、张扬。 本部分由陕西省食品药品监督管理局负责解释。 本部分首次发布。 联系信息如下： 单位：陕西省食品药品监督管理局 电话：029-62288000 地址：西安市高新六路56号 邮编：710065 III DB61/T 1001.5—2015 保健用品微生物限度检查 第 5 部分：霉菌和酵母菌数测定 1 范围 DB61/T 1001的本部分规定了保健用品中霉菌和酵母菌数的测定方法。 本部分适用于陕西省保健用品中霉菌和酵母菌数的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB61/T 1001.1-2015 保健用品微生物限度检查 第 1 部分:总则 3 设备和材料 对保健用品进行霉菌和酵母菌数的测定时，除应具备微生物实验室常规灭菌和培养设备外，其他设 备和材料应符合以下规定的要求： a) 霉菌培养箱：温度应控制在 28℃±1℃； b) 恒温水浴箱：温度应控制在 46℃±1℃； c) 冰箱：温度应控制在 2℃～5℃； d) 高压灭菌锅； e) 电子天平：感量为 0.1g； f) 电磁炉； g) 振荡器或均质器； h) 灭菌吸管：容量为 1mL（具 0.01mL 刻度）、10 mL（具 0.1mL 刻度）； i) 丝口瓶或锥形瓶：容量为 250mL、500mL； j) 灭菌培养皿：直径为 90mm； k) pH 计或精密 pH 试纸； l) 放大镜或/和菌落计数器。 4 培养基和试剂 4.1 无菌生理盐水 无菌生理盐水应符合 DB61/T 1001.1-2015 中 3.6.3 规定的要求。 4.2 孟加拉红培养基 4.2.1 孟加拉红培养基制备材料的种类和量应符合以下要求： a) 蛋白胨：5g； b) 葡萄糖：10g； c) 磷酸二氢钾：1g； 1 DB61/T 1001.5—2015 硫酸镁（无水）：0.5g； 琼脂：20g； f) 孟加拉红：0.033g； g) 氯霉素：0.1g； h) 蒸馏水：1000mL。 4.2.2 孟加拉红培养基的制备方法应为：将上述各成份（不包含氯霉素）加入蒸馏水中，加热溶化，补 足蒸馏水至 1000mL，分装后，121℃灭菌 20min。倾注于平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。 d) e) 5 操作步骤 5.1 样品的稀释 5.1.1 应按照 DB61/T 1001.1-2015 中 4.4 的规定制备 1:10 样品匀液。 5.1.2 应取 1mL 的 1:10 样品匀液注入含有 9mL 无菌生理盐水的试管中，振摇试管或用吸管反复吹打使 其混合均匀，制成 1:100 样品匀液。 5.1.3 应按照 5.1.2 的规定，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增 1 个稀释剂，换用 1 次 1mL 无菌吸 管。 5.1.4 应根据对样品污染状况的估计，选择 2 个或 3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）， 在进行 10 倍递增稀释时，每个稀释剂分别吸取 1mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度至少做两个平 皿。同时，应分别吸取 1mL 稀释液加入两个平皿内作空白对照。 5.1.5 应及时向平皿倾注 15mL～20mL 冷却至 46℃的孟加拉红琼脂培养基（可将其置于 46℃±1℃恒温 水浴箱中保温），转动平皿使其混合均匀。 5.2 培养 应在培养基凝固后，将平板倒置，在 28℃±1℃条件下培养 5d，观察并记录。 5.3 菌落计数 应以肉眼观察菌落数，必要时可用放大镜。应根据菌落形态，分别记录各稀释倍数和相应的霉菌和 酵母菌数；菌落计数应以菌落形成单位（colony-forming units，即 CFU）表示。 6 结果和报告 6.1 结果计算 6.1.1 应先计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。 6.1.2 应选取平均菌落数在 10CFU～150CFU 之间的平皿，作为霉菌与酵母菌计数范围。 6.1.3 若只有一个稀释度的平均菌落数在 10CFU～150CFU 之间，则应按该稀释度的平均菌落数乘以稀释 倍数计算。 6.1.4 若两个稀释度的平均菌落数均在 10CFU～150CFU 之间，则应求出两菌落总数的比值：若比值小于 等于 2，则应计算两个稀释度下平均菌落数的平均值；若比值大于 2，则应计算稀释度较低平皿的平均 菌落数。 6.1.5 若所有平板上的菌落数均大于 150CFU，则应按最高稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 6.1.6 若所有平板上的菌落数均小于 10CFU，则应按最低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 2 DB61/T 1001.5—2015 6.1.7 当所有稀释度的平均菌落数均不在 10CFU～150CFU 之间时，若其中一个稀释度下的平均菌落数大 于 150CFU，而相邻稀释度下的平均菌落数小于 10CFU，则应以更接近 10CFU 或 150CFU 的平均菌落数乘 以相应的稀释倍数计算。 6.1.8 若所有稀释度下的平板均无菌落生长，则以＜1 乘以最低稀释倍数计算。 6.2 结果报告 6.2.1 若菌落数小于 100CFU，则应按“四舍五入”原则修约，以整数报告结果。 6.2.2 若菌落数大于等于 100CFU，则应按“四舍五入”原则修约，保留 2 位有效数字；也可用 10 的指 数形式来表示，并按“四舍五入”原则修约，保留 2 位有效数字。 6.2.3