(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210010791.0 (22)申请日 2022.01.06 (71)申请人 合肥艾迪康医学检验实验室有限公 司 地址 230088 安徽省合肥市高新区天柱路5 号信息产业园B座一层、 二层、 三层、 五 层 (72)发明人 王淑一　张敏　 (74)专利代理 机构 浙江杭州金通专利事务所有 限公司 3 3100 代理人 黄素萍 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测融合基因FNDC3B/RARA的融合型别的寡 核苷酸及应用 (57)摘要 本发明为检测融合基因FNDC3B/RARA的融合 型别的寡核苷 酸及应用。 先采用含有三种型别引 物的多重引物荧光PCR进行初检。 若出现阳性， 再 用特异性引物荧光PCR进行具体型别鉴定， 这样 既降低了初检成本， 又提高了检测通量。 本发明 所述试剂盒特异性好， 灵敏度高， 通量大， 适用于 大批量样本检测。 对于白血病诊断、 调整治疗方 案、 评价治疗效果、 预测预后、 预防临床复发都具 有重要意 义。 权利要求书2页 说明书9页 序列表2页 附图1页 CN 114410783 A 2022.04.29 CN 114410783 A 1.检测融合基因FNDC3B/RARA的融合型别的寡核苷酸， 其特征在于， 包括引物RARA/ FNDC3B 2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑25‑R、 RARA/FNDC3B  2‑26‑R、 FNDC3B/RARA  24‑3‑F、 FNDC3B/ RARA 24‑3‑R和探针RARA /FNDC3B2‑Probe、 FNDC3B/RARA  24‑3‑Probe， 所述引物和探针序列 如下： RARA/FNDC 3B 2‑F:CAGCAC CAGCTTCCAGTTAGTG RARA/FNDC 3B 2‑25‑R:CCTTCTAACTGTGTTACTCGAG G RARA/FNDC 3B 2‑26‑R:TGTGGCTTCTTCTCCCTTGTACA FNDC3B/RARA 24‑3‑F:AACCTATACCTTCAGCACA ACC FNDC3B/RARA 24‑3‑R:GTGGTAGCCTGAGGACTTGT RARA/FNDC 3B 2‑Probe:HEX‑ATATAGCACAC CATCCC‑TAMRA FNDC3B/RARA 24‑3‑Probe:FAM ‑AGACCCAGAGCAGCAGT TCTGAAGAGA–TAMRA。 2.根据权利要求1所述的寡核苷酸， 其特征在于， 用于鉴别RARA/FNDC3B  2‑25的引物 RARA/FNDC3B  2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑25‑R以及探针RARA/FNDC3B2 ‑Probe； 用于鉴别RARA/ FNDC3B 2‑26的引物RARA/FNDC3B  2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑26‑R以及探针RARA/FNDC3B  2‑ Probe； 用于鉴别FNDC3B/RARA  24‑3的引物FNDC3B/RARA  24‑3‑F、 FNDC3B/RARA  24‑3‑R以及 探针FNDC 3B/RARA 24‑3‑Probe。 3.根据权利要求1所述的寡核苷酸， 其特征在于， 还包括用于内参基因ABL检测的引物 ABL‑F、 ABL‑R以及探针ABL ‑Probe， 所述引物和探针序列为： ABL‑F:GATACGA AGGGAGGGTGTACCA ABL‑R:CTCGGCCAGGGTGTTGAA ABL‑Probe:CY5‑GCTTCTGATGGCAAGCTCTACGTCTC CT‑BHQ。 4.检测融合基因FNDC3B/RA RA的融合型别的寡核苷酸的试剂盒， 其特征在于， 包括引物 RARA/FNDC3B  2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑25‑R、 RARA/FNDC3B  2‑26‑R、 FNDC3B/RARA  24‑3‑F、 FNDC3B/RARA  24‑3‑R和探针RARA/FNDC3B2 ‑Probe、 FNDC3B/RARA  24‑3‑Probe， 所述引物和 探针序列如下： RARA/FNDC 3B 2‑F:CAGCAC CAGCTTCCAGTTAGTG RARA/FNDC 3B 2‑25‑R:CCTTCTAACTGTGTTACTCGAG G RARA/FNDC 3B 2‑26‑R:TGTGGCTTCTTCTCCCTTGTACA FNDC3B/RARA 24‑3‑F:AACCTATACCTTCAGCACA ACC FNDC3B/RARA 24‑3‑R:GTGGTAGCCTGAGGACTTGT RARA/FNDC 3B 2‑Probe:HEX‑ATATAGCACAC CATCCC‑TAMRA FNDC3B/RARA 24‑3‑Probe:FAM ‑AGACCCAGAGCAGCAGT TCTGAAGAGA–TAMRA。 5.根据权利要求 4所述的试剂盒， 其特 征在于， 还 含有红细胞裂解液。 6.根据权利要求 4所述的试剂盒， 其特 征在于， 还 包括阳性对照品和阴性对照品。 7.一种降低融合基因FNDC 3B/RARA检测成本的方法， 包括以下步骤： (1)抽提血 液样本中的总RNA； (2)将步骤1中提取的RNA反转录为cDNA； (3)采用检测体系PCR反应液1结合实时荧光PCR， 对样本进行初步检测， 若初步检测结 果显示为阴性， 则停止检测；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114410783 A 2(4)若步骤3中的检测结果显示为阳性， 分别以检测体系PCR反应液2、 检测体系PCR反应 液3、 检测体系PCR反应液4结合实时荧 光PCR对检测样本进行 具体型别的进行鉴定； (5)结果判断： 将阈值线调整至背景信号及阴性扩增线以上， 得出Ct值； 1)内参阳性时， 检测结果才认为有效； 2)阳性判断标准： Ct<36， 为阳性； 35≤Ct≤38， 为疑似阳性， 需要再次 验证； Ct＞38， 为阴性。 8.根据权利要求7 所述的方法， 其特 征在于， 所述 检测体系PCR反应液1包括： RARA/FNDC3B  2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑25‑R、 RARA/FNDC3B  2‑ 26‑R、 FNDC3B/RARA  24‑3‑F、 FNDC3B/RARA  24‑3‑R和探针RARA/FNDC3B  2‑Probe、 FNDC3B/ RARA 24‑3‑Probe； 检测体系PCR反应液2包括RARA/FNDC3B  2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑25‑R以及探针RARA/ FNDC3B 2‑Probe； 检测体系PCR反应液3包括RARA/FNDC3B  2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑26‑R以及探针RARA/ FNDC3B 2‑Probe； 检测体系PCR反应液4包括FNDC3B/RARA  24‑3‑F、 FNDC3B/RARA  24‑3‑R以及探针 FNDC3B/RARA 24‑3–Probe 检测融合基因FNDC 3B/RARA的融合型别的方法， 包括 (1)抽提血 液样本中的总RNA； (2)将步骤1中提取的RNA反转录为cDNA； (3)采用检测体系PCR反应液1结合实时荧光PCR， 对样本进行初步检测， 若初步检测结 果显示为阴性， 则停止检测； 若初步检测结果显示 为阳性则判断为ML L/CBP融合基因型； (4)为可选步骤， 若步骤3中的检测结果显示为阳性， 分别以检测体系PCR反应液2、 检测 体系PCR反应液3、 检测体系PCR反应液4结合实时荧光PCR对检测样本进行具体型别的进行 鉴定； (5)结果判断： 将阈值线调整至背景信号及阴性扩增线以上， 得出Ct值； 1)内参阳性时， 检测结果才认为有效； 2)阳性判断标准： Ct<36， 为阳性； 35≤Ct≤38， 为疑似阳性， 需要再次 验证； Ct＞38， 为阴性。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特 征在于， 检测体系PCR反应液1包括： RARA/FNDC3B  2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑25‑R、 RARA/FNDC3B  2‑ 26‑R、 FNDC3B/RARA  24‑3‑F、 FNDC3B/RARA  24‑3‑R和探针RARA/FNDC3B  2‑Probe、 FNDC3B/ RARA 24‑3‑Probe； 检测体系PCR反应液2包括RARA/FNDC3B  2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑25‑R以及探针RARA/ FNDC3B 2‑Probe； 检测体系PCR反应液3包括RARA/FNDC3B  2‑F、 RARA/FNDC3B  2‑26‑R以及探针RARA/ FNDC3B 2‑Probe； 检测体系PCR反应液4包括FNDC3B/RARA  24‑3‑F、 FNDC3B/RARA  24‑3‑R以及探针 FNDC3B/RARA 24‑3–Probe。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114410783 A 3