(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210156994.0 (22)申请日 2022.02.21 (71)申请人 广州白云山 光华制药股份有限公司 地址 510285 广东省广州市海珠区南石路 一号 (72)发明人 蒋研风羊　晁志　郑如文　谢雪那　 刘宏　黄荣　杜海泳　 (74)专利代理 机构 广州广典知识产权代理事务 所(普通合伙) 44365 专利代理师 顾书玲　万志香 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 基于SCAR分子标记鉴定竹叶柴胡和/或窄竹 叶柴胡的方法 (57)摘要 本发明公开了一种基于SCAR分子标记鉴定 竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的方法， 所述SCAR分 子标记的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示； 所述 引物对的正向引 物的序列如SEQ  ID No.2所示， 反向引物的序列如SEQ  ID No.3所示。 本发明的 SCAR分子标记、 以及引物对， 可以特异性地、 准确 地鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡， 为竹叶柴胡 和/或窄竹叶柴胡的开发利用与保护提供研究基 础， 亦可为其它中药材遗传特性和鉴别提供借 鉴。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图2页 CN 114438248 A 2022.05.06 CN 114438248 A 1.一种鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的SCA R分子标记， 其特征在于， 所述SCA R分子标 记的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示。 2.权利要求1所述的SCAR分子标记在鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡中的应用。 3.一种鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的引物对， 其特征在于， 所述引物对包括： 如SEQ   ID No.2所示的正向引物和如SEQ  ID No.3所示的反向引物。 4.权利要求3所述的引物对在鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡中的应用。 5.一种鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的制剂， 其特征在于， 所述制剂包括权利要求3 所述的鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的引物对。 6.根据权利要求5所述的鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的制剂， 其特征在于， 所述制 剂为试剂盒。 7.一种鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)、 以待鉴定柴胡样品的DNA为模板， 权利要求3所述的引物对为引物， 进行PCR扩增； (2)、 对PCR扩增产物进行电泳检测， 鉴定待鉴定柴胡样品是否为竹叶柴胡或窄竹叶柴 胡。 8.根据权利要求7所述的鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的方法， 其特征在于， 步骤(1) 中所述PCR扩增的反应体系为： 模板1.5 μL～2.5 μL、 上游引物0.3 μL～0.5 μL、 下游引物0.3 μL ～0.5 μL； TaqMix  5 μL～7 μL； 去离 子水加至15 μL。 9.根据权利要求7所述的鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的方法， 其特征在于， 步骤(1) 中所述PCR扩增的反应程序为： 94℃预变性， 保持4min； 94℃变性， 保持30s， 54℃退火， 保持 30s， 72℃延伸， 保持1mi n， 共35个循环； 72℃保持8mi n。 10.根据权利要求7所述的鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的方法， 其特征在于， 步骤 (2)中， 若PCR扩增产物出现15 0bp特异性条 带， 待鉴定柴胡样品为竹叶柴胡或窄竹叶柴胡。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114438248 A 2基于SCAR分子标记鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的方 法 技术领域 [0001]本发明属于药材检测技术领域， 更具体地， 本发明涉及一种鉴定竹叶柴胡和/或窄 竹叶柴胡的S CAR分子标记、 引物对、 以及基于S CAR分子标记 鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡 的方法。 背景技术 [0002]柴胡属是分类和系统发育研究中的一个 “困难”类群， 在柴胡属的植物鉴定中， 常 以小总苞片的宽度、 叶的形状、 伞幅的多少及果 实棱槽油管数等常作为主要分类依据。 而对 于柴胡药材而言， 由于药材之间形态、 结构极近似， 性状、 显微(组织构造和粉末)等传统鉴 定方法有比较大的难度， 即使 是有丰富经验的专 业人员或药师， 也费时费力， 并且不能保证 精确无误。 [0003]竹叶柴胡， 性味苦寒， 具有散风退热、 疏肝解郁之功效， 可用于感冒发热。 西 南地区 惯用竹叶柴胡的全草入药， 其曾在一定时期作为正品柴胡来使用。 竹叶柴胡及其变种窄竹 叶柴胡为目前市场上药材柴胡的主要三大来源之一。 但不同种柴胡药材的临床疗效并不相 同， 在使用时还应与正品北柴胡、 狭叶柴胡加以区分。 [0004]在普通DNA条形码鉴定技术中， ITS、 trnH ‑psbA、 matK、 rbcL和rps16等DNA分子标记 为柴胡属 植物的分类鉴定与系统学研究提供了重要依据。 然而， 虽然柴胡属的单系性已经 得到分子证据的支持， 但属内不同物种间的系统发育关系目前仍然存在争议。 [0005]中药资源准确的基原鉴定， 是保证用药安全有疗效的关键。 因此， 建立一种准确、 快速、 可靠的柴胡药 材鉴定方法， 对保障柴胡药 材的质量及用药安全具有重要意 义。 [0006]在柴胡属叶绿体基因组中富含大量的遗传信息， 如大量单核苷酸多态性位点 (SNP)、 插入缺 失位点、 结构变异 位点和拷贝 数变异位点， 这也将对柴胡属植物分类、 药材鉴 定研究有重要的指导 意义。 [0007]SCAR(Sequence  character ized amplified  regions， 序列特征扩增区域)标记技 术， 是用特异引物对基因组DNA进 行扩增， 获得可以反映标记 性状的特异DNA片段的技术， 通 常在不同的个体之间表现为存在或缺 失， 在图谱中通常为单一条带的有或无， 简单、 结果可 靠、 成本低， 可用于作物杂交育种 、 品种鉴定和混伪品的鉴别当中。 [0008]提供一种基于SCAR分子标记的、 适合于鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的方法非 常有意义。 发明内容 [0009]基于此， 本发明的目的之一在于提供一种鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的SCAR 分子标记， 该SCAR分子标记可以特异地、 准确地 鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡。 [0010]实现上述发明目的 的具体技 术方案包括如下： [0011]一种鉴定竹叶柴胡和/或窄竹叶柴胡的SCAR分子标记， 所述SCAR分子标记的核苷 酸序列如SEQ  ID No.1所示。说　明　书 1/9 页 3 CN 114438248 A 3