(19)国家知识产权局 (12)实用新型专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 20212325 6567.X (22)申请日 2021.12.20 (73)专利权人 云南省农业科 学院花卉研究所 地址 650000 云南省昆明市盘龙区北京路 2238号 (72)发明人 李金泽　陈薇　陈苇　王敬乔　 张艺萍　王丽花　苏艳　杨秀梅　 许凤　张丽芳　 (74)专利代理 机构 合肥上博知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 3418 8 专利代理师 王晶 (51)Int.Cl. C12M 1/12(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)实用新型名称 植物胚性小孢子快速分离纯化装置 (57)摘要 本实用新型公开了一种植物胚性小孢子快 速分离纯化装置： 研磨棒为平头磨砂空心玻璃 管， 研钵为在接水盘内设置的至少三层嵌套式金 属内套， 金属内套外设置嵌套式金属外套， 在上 层金属内套与中层金属 内套之间设置有不锈钢 粗网， 不锈钢粗网的折边压入对应的金属外套之 间； 在中层金属内套与下层金属内套之间设置有 不锈钢细网， 不锈钢细网的折边压入对应的金属 外套之间； 本实用新型可以实现不锈钢粗网和不 锈钢细网与金属内套和金属外套的自由分离， 拆 洗组装方便， 不易生锈； 研磨过程中植物胚性小 孢子被分离纯化在双网之间， 大幅度减少了反复 摩擦造成的机械损伤， 减免了反复离心转移环 节， 大幅度简化了操作程序， 减少了污染风险和 细胞生理生 化上的应 激反应。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 217149167 U 2022.08.09 CN 217149167 U 1.一种植物胚性小孢子快速分离纯化装置， 其特征在于， 包括研磨棒和研钵， 研钵包括 接水盘， 在接水盘内设置有至少三层嵌套式金属内套， 金属内套外设置有等高的嵌套式金 属外套； 在上层金属内套与中层金属内套之间设置有不锈钢粗网， 不锈钢粗网的折边压入上层 金属外套与中层金属外套之间， 不锈钢粗网孔径在25 0‑400目； 在中层金属内套与 下层金属内套之间设置有不锈钢细网， 不锈钢细网的折边压入中层 金属外套与下层金属 外套之间； 不锈钢细网的孔径在400 ‑1000目； 锈钢 粗网孔径大于不锈 钢细网的孔径。 2.如权利要求1所述的植物胚性小孢子快速分离纯化装置， 其特征在于， 所述的研磨棒 为平头磨砂空心玻璃管。 3.如权利要求2所述的植物胚性小孢子快速分离纯化装置， 其特征在于， 研磨棒上套设 有透明防尘板 。 4.如权利要求1所述的植物胚性小孢子快速分离纯化装置， 其特征在于， 不锈钢粗网孔 径在250‑350目之间； 不锈钢细网的孔径在40 0‑1000目之间。 5.如权利要求1所述的植物胚性小孢子快速分离纯化装置， 其特征在于， 下层金属内套 和下层金属外套上均设置有拱 形孔洞， 用于排除提取 液。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 217149167 U 2植物胚性小孢子快速分离纯化 装置 技术领域 [0001]本实用新型 涉及一种植物胚性小孢子快速分离纯化装置 。 背景技术 [0002]小孢子培养、 未受精胚培养和假受精胚培养等双单倍体育种技术是现代育种的核 心技术之一。 [0003]双单倍体技术的实质是诱导大小孢子在无 融合条件下转向胚性发育， 可分为活体 诱导与离体培养两种。 活体诱导法在玉米等少数作物获得非常成功的应用， 但广泛适用于 各种作物的方法则是诱导大小孢子胚发育的离体培养。 得益于雄性生殖细胞数量庞大， 利 用雄配子(小孢子)如花药培养或小孢子细胞培养是获得单倍体的主要 形式， 其最佳途径 为 雄配子直接诱导形成胚状体而非愈伤组织。 小孢子培养是效率最高的培养方式， 但至今仅 在以十字花科植物为主的约20个物种上获得成功应用。 花药培养虽然简单易行， 但却 严重 受到花丝、 花药壁等体细胞诱导增殖能力更强的影响， 往往难以获高效的双单倍体培养体 系。 [0004]深入的研究表明小孢子胚诱导培养受基因型和培养环境双重影响。 小孢子培养打 断了小孢子正常配子体发育途径， 而转向不可逆的孢子体发育途径， 最终由单细胞发育成 胚和植株。 这种转向相当于从高速行驶的列车上掉出少量乘客， 没有受伤而且还能实现孢 子生殖。 这种转变可能很 短时间就会错过， 因此整个培养前 处理环节都显得非常重要， 不仅 要从大量小孢子中快速筛选出有望从配子体发育转向孢子体发育的少量 “胚性小孢子 ”， 而 且要确保胚性小孢子受伤很小， 能够继续分裂和发育。 小孢子具有 “二型性”， 绝多数植物胚 性小孢比普通小孢子更圆更大， 体积相关可以接近一倍。 少数植物胚性小孢子比普通小孢 子瘦瘪。 [0005]通常小孢子提取分离要经历花蕾或花药化学消毒灭菌， 在培养液中研磨破碎， 混 和液过筛分离花萼、 花瓣、 子房壁、 花药壁等组织和纤维， 再用800RPM低速离心3次， 分离弃 去上层破碎的体细胞和各类浆液， 留下底层的小孢子 。 [0006]再调到适 合密度悬浮培 养。 在这一个过程中， 存在以下问题： [0007]1.高温灭菌后筛网壁上焊点生锈， 筛网壁的缝隙残留植物组织难以清理， 致使铁 锈等杂质混入培 养液中。 [0008]2.研钵粗重， 转移培养液不方便， 容易在操作中造成菌类污 染。 虽然小孢子有较为 坚硬的孢粉层， 但研磨过程中依然可能造成大量小孢子挤压损伤， 萌发孔膨胀 “出芽”的现 象， 失去培 养价值。 [0009]3.小孢子在分离纯化过程中， 多次经历溶液在不同容器之间转移， 用吸管将细胞 反复沉淀和悬浮， 在无菌的超净工作台和有菌的离心机之间反复转移， 大大增加了污染风 险， 并可能对小孢子 造成机械损伤和应激反应。 [0010]4.分离纯化之后， 大量瘦弱、 畸形、 破裂、 没有培养价值的小孢子依然占据主导， 与 少量的孢满、 浑圆， 体积 较大的胚性小孢子 混在一起培养， 部 分密度较高的细胞器或碎屑依说　明　书 1/4 页 3 CN 217149167 U 3