ICS 65.020.01 B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3331—2018 热带作物品种资源抗病虫鉴定技术规程 咖啡锈病 Technical code of practice for resistance identification to diseases and insects of tropicalcropvarieties- Coffeeleaf rust 行业标准信息服务平台 2018-12-19发布 2019-06-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3331—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出。 本标准由农业农村部热带作物及制品标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：云南省德宏热带农业科学研究所、中国热带农业科学院香料饮料研究所。 本标准主要起草人：张洪波、白学慧、桑利伟、李锦红、孙世伟、郭铁英、刘爱勤、周华、夏红云、萧自 位、肖兵。 行业标准信息服务平台 I NY/T3331—2018 热带作物品种资源抗病虫鉴定技术规程 咖啡锈病 1范围 本标准规定了咖啡品种资源抗锈病鉴定的术语和定义、接种体制备、抗性鉴定、抗性评价等技术 要求。 本标准适用于小粒种咖啡（Coffea arabicaL.）、中粒种咖啡（CoffeacanephoraPierreex A.Froehner）和大粒种咖啡（Coffealiberica Hiern）种质资源咖啡锈病抗性的鉴定。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 咖啡锈病coffeeleaf rust 由咖啡驼孢锈菌（HemileiavastatrirBerk.etBr.）所引起的咖啡病害。 2. 2 生理小种physiologicalrace 病原菌种、变种或专化型内的分类单位，各生理小种之间形态上无差异，但对具有不同抗病基因的 鉴别品种的致病力存在差异的类群。 2. 3 鉴别寄主differentialhost 用于鉴定和区分特定病原菌生理小种或菌系的一套带有不同抗性基因的寄主品种。 2. 4 侵染型infectiontype 根据咖啡叶片过敏性坏死反应有无和其强度划分的病斑类型，用以表示咖啡种质抗锈病程度，按 10个类型记载。 业标准 3接种体制备 3.1咖啡驼孢锈菌的繁殖材料 锈菌繁殖材料选用盆栽苗，采自小粒种咖啡的锈菌：用感病品种马塔里（Carabicavar.Matari 849/1）或卡杜拉（C.arabicavar.Catura19/1）繁殖，采自未知遗传背景的咖啡（如大粒种、中粒种、中小 粒种杂交种）上的锈菌，用感病品种高种咖啡（C.ercelsaLongKoi168/12)繁殖。 3.2咖啡驼孢锈菌的分离 从田间采集具有典型咖啡锈菌病斑的咖啡发病叶片，用解剖刀轻轻刮下橙黄色的夏孢子，并将夏孢 子涂在4.1所述的感病品种幼嫩新叶背面，用软毛刷轻刷，使夏孢子均匀分布，并轻轻喷上水雾，至有水 膜产生为止，套袋遮光保湿48h，30d～45d后观察，待夏孢子刚产生时用塑料袋套上接种叶片，5d~7d 后即获得分离物。操作前、后对用具和手用75%酒精进行消毒。 3.3咖啡锈菌病原纯化 选择3.2中接种叶片上出现的单个夏孢子堆，采用3.2方法扩繁2次～3次，即获得纯化的锈菌 株系。 3.4菌种收集 1 NY/T 3331—2018 将3.3纯化扩繁的锈菌轻轻刮入胶囊中，盖好胶囊盖，并标记菌株编号。 3.5菌种保存 3.5.1短期保存 保存时间短于3个月为短期保存。将装菌种的胶囊放人相对湿度为40%～50%的干燥器内，置于 低于5℃冰箱中备用。 3.5.2长期保存 保存时间长于3个月，低于3年为长期保存。将装菌种的胶囊放人相对湿度为40%～50%的干燥 器内，置于低于5℃冰箱中干燥10d～15d，然后将胶囊装入冻存管用液氮速冻，置于液氮或超低温冰箱 （一80℃左右）中保存。 3.6菌种活化 48℃的水浴锅中活化5min后，置于室 温10min后即可进行接 3.7生理小种鉴定 用于抗性鉴定 种白 3.7.1鉴别寄主 RES 性美区的 东准鉴别代 采用一套已 知抗 附 3.7.2鉴定方法 S 将按照3 繁的咖 驼孢锈菌 主逐一进行接 种，在接种后 45 闻，当接种啡片充 见附录B。 30 3.7.3抗病性分 级标准 抗病性分级 为免疫 抗CMR 6MS2 優染 4 6.7 人 8.9 3.7.4生理小种划分 K 根据锈菌与鉴别寄 相互作用产生的抗病或 定不同菌株所属的生理 小种种类。按表A.2不能确定的生理小种 ace(vl,2,5)" 表示 4抗性鉴定 4.1 感病对照品种 小粒种咖啡采用马塔里（Carabicavar.Matari849/1)或卡杜拉（Carabicavar.Catura19/1)作感 病对照品种，未知遗传背景的咖啡（如大粒种、中粒种、中小粒种杂交种）采用高种咖啡（CeacelsaLong Koi168/12)作对照品种。 4.2鉴定材料 鉴定材料在遮阴温室按同一方法和时间用花盆进行种植，种植期间除不使用杀菌剂，其他按日常管 理。接种前1d浇足水，在幼嫩新叶的叶柄挂上标签，标明接种日期和菌种编号，每株苗选择2片～4片 嫩叶，每份材料重复3次，每重复5株苗。 4.3接种 2 NY/T3331—2018 4.3.1接种时间 在16：00以后进行接种。 4.3.2接种方法 按照3.2的规定执行。 4.4接种后管理 接种后将咖啡材料置于遮阴温室，期间除不使用杀菌剂，其他按日常管理。当刚产生孢子时，用塑 料袋套住接种叶片，或用塑料膜制成的罩子进行隔离。 4.5病情调查及记载 4.5.1调查时间 对照品种充分显症后，且侵染型达到“8”以上时开始病情调查。 4.5.2侵染型记载及标准 病斑侵染型按10个类型划分，其划分标准见附录B。每一鉴定材料调查30片叶，即每株调查2片 叶，逐叶调查记载侵染型，当同一材料出现不同侵染型时，按主要侵染型记载。 4.6鉴定后无害化处理 鉴定完成后，将接种枝条剪除，并对其用杀菌剂浸泡30min进行灭菌处理。 5抗性评价 5. 1. 1 鉴定有效性判定 鉴定中感病对照品种侵染型为“8”或“9”，则该批次鉴定视为有效，侵染型低于“5”时，该试验无效。 5.1.2抗性判定 依据鉴定材料发病程度确定其对锈病的抗性水平，其评价标准见表1。若材料中出现明显的抗、感 类型差异，应在调查表中注明“抗性分离”，其比例以“/”隔开。 咖啡品种锈病抗性鉴定记录表见附录C。 行业标准信息服务平台 3 NY/T3331—2018 附录A (资料性附录） 咖啡锈病病原菌和生理小种 A.1学名及形态描述 A.1.1学名 咖啡驼孢锈菌HemileiavastatrirBerk.etBroome. A. 1.2 形态描述 属真菌界（Fungi）、担子菌亚门（Basidiomycotina）、冬孢菌纲（Teliomycetes）、锈菌目（Uredinales）、 驼孢锈菌属（Hemileia）。夏孢子堆生于寄主叶片背面，环状排列；夏孢子卵形或肾形，橙黄色，腹面平 滑，背面密生小瘤，（25～46）μmX（20～39）μm。冬孢子堆与夏孢子堆相似；冬孢子常呈陀螺形或芜菁 根状，无色至米黄色，表面平滑，上部有乳状突起，柄丛生，不脱落，（20～27）μm×（16～20）μm。冬孢子 遇水即萌发形成粗棒状担子，担子4个细胞，上面着生4个梨形或卵形单孢子。该菌致病性有生理分化 现象，已定名50个生理小种，采用罗马数字表示，即I、Ⅱ、Ⅲ我国出现并已鉴定的生理小种有11 个,分别为I、I、V、VI、XV、XXI、XXII、XXIV、XXXI、XXXIV、XLII A.2 2生理小种鉴定 A.2. 1 采用的鉴别寄主 生理小种鉴别使用的寄主有19个，其中小粒种咖啡（coffeaarabica）或四倍体杂种咖啡（Tetra pliodinterspecifichybrids）共15个，二倍体咖啡（Cspp.）共4个，详见表A.1。 A. 2. 2 咖啡锈菌生理小种致病类型 咖啡锈菌生理小种在鉴别寄主上的致病类型参见表A.2。 表A.1咖啡锈菌生理小种鉴别寄主及其抗病基因 咖啡品种 鉴别寄主 带有抗病基因 849/1 Matari 基因不明 128/2 Dilla &Alghe SH1 小 63/1 Bourbon SH5 粒 1343/269 H.Timor SH6 种 87/1 Geisha SH1,5 咖 32/1 DK 1/6 SH2.5 啡 33/1 S.288-23 SH3.5 及 110/5 S.4Agaro SH4.5 四 1006/10 S.12Kaffa SH1,2,5 644/18 H. Kawisari SH5,? 倍 H419/20 SH5,6,9 体 H420/2 SH5,8 杂 H420/10 SH5.6.7.9 种 832/2 H. Timor SH5,6.7,8,9,? Catimor 7960/117 SH5.7or SH5.7.9 Cracemosa(369/3) 基因不明 二倍 C ercelsa Longkoi(168/12) 基因不明 体咖 CcangensisUganda(263/1) 基因不明 啡 Ccangensis Uganda(829/1) 基因不明 4 咖啡锈菌生理小种在鉴别寄主上的致病类型 表A.2 鉴别寄主 I II IV VI MI VI X XI IN XII XIV XV IAX XI XVII XIX XX XXI XXI 849/1