UDC 628.512 : 543.062 z 15 中华人民共和国国家标准 GB/T 15440--1995 环境中有机污染物遗传毒性检测的 样品前处理规范 Guidelines for preparing samples for genetoxicity testing of organic pollutants in environment 1995-08-01实施 1995-03-25发布 国家环境保护局 发布 国家技术监督局 中华人民共和国国家标准 环境中有机污染物遗传毒性检测的 样品前处理规范 GB/T 15440-1995 Guidelines for preparing samples for genetoxicity testing of organic pollutants in environment 本规范规定了环境中有机污染物遗传毒性检测时样品前处理的技术要求。 本规范分五篇： 第一篇大气可吸入颗粒物样品前处理 第二篇地面水及废水样品前处理 第三篇非水液态废弃物样品前处理 第四篇土壤及沉积物样品前处理 第五篇固体废弃物样品前处理 规范所给定义仅限定在本规范内使用，不具普遍性。 本规范不对样品前处理的质量控制及操作安全性作全面阐述，仅对特定问题给以说明，其他问题应 遵从合格实验室准则的有关原则。 本规范的质量控制原则皆以遗传毒性检测系统本身正常为前提。 本规范不另提供记录表格，样品前处理过程的记录应遵从常规分析测试原则。 第一篇大气可吸人颗粒物样品前处理 1适用范围 本规范适用于大气可吸入颗粒物中非挥发性有机物，不适用于大气可吸入颗粒物的气态及半气态 有机物。 2 引用标准 GB6921大气飘尘浓度测定方法 GB6682实验室用水规格和实验方法 3定义 可吸入颗粒物：能长期悬浮在空气中，空气动力学当量直径≤10μm的、能进入人体呼吸道的颗粒 物。 4仪器、设备 4.1采样系统：符合GB6921的要求。 4.2超细玻璃纤维滤膜：过滤效率不低于99.99%。 国家环境保护局1995-03-25批准 1995-08-01实施 1 GB/T15440—1995 4.3索氏提取器：500mL容量。 4.4超声波清洗器：250W功率。 4.5分液漏斗。 4.6旋转蒸发器。 4.7KD浓缩器。 4.8钢瓶。 4.9减压阀。 4.10高纯氮气。 4.11一般实验室器具及玻璃器血。为避免其他有机物质的干扰，所有玻璃器皿及直接接触样品的器具 均需洗净，并经纯水及纯有机溶剂冲洗。 5 试剂 5.1纯水：符合GB6682实验室用水规格中一级水标准的水，即电导率≤0.01uS/cm（25℃），吸光度 ≤0.001(254nm，1cm光程）二氧化硅含量≤0.01mg/L。可用去离子水（加少量KMnO,)经全玻璃器 血重蒸馏制得。 5.2溶剂：等级不得低于分析纯，且皆应在玻璃容器中重蒸馏后方能使用。 5.2.1 二氯甲烷。 5.2.2二甲基亚砜(DMSO)。 5.3氢氧化钠:c(NaOH)=1 mol/L。 5. 4 盐酸:c(HCI)=1 mol/L。 5.5无水硫酸钠。 6样品采集 按GB6921的方法采集一定量的大气可吸入颗粒物，记录流量及采样时间。采样前，将滤膜于 500℃灼烧半小时后称重。采样后，将对折的滤膜用硫酸纸包好，装入黑色纸袋，于4℃条件下运输并于 采样前的称重条件下平衡至少24h后称重。称重后的滤膜装入塑料袋，于一20℃以下避光保存。采样后 应尽快进行样品制备。 采样时间不应超过24h，在此期间如不能采集到足量的尘，可在同一采样地同时设置两个或更多 的采样器，将所得尘样合并为一个样品。 7样品制备 7.1有机物分离提取 可采用索氏提取法、超声提取法，必要时进行不同有机组分的提取。 7.1.1索氏提取 将样品滤膜对折成卷状，放入提取器。分别用100mL二氯甲烷在溶剂沸点条件下（40℃）提取2 次，每次16h(每小时回流5～10次),将两次的提取液冷却至室温后合并。用孔径≤0.5mm的微孔全 玻璃砂芯漏斗将提取液滤至一圆底烧瓶中。 7.1.2超声提取 将滤膜剪成1cm小片，放入瓶塞配有聚四氟乙烯衬垫的玻璃试管中，在超声波清洗器中用二氯甲 烷提取2次，每次10min。用孔径≤0.5mm的微孔全玻璃砂芯漏斗将提取液滤至一圆底烧瓶中。 7.1.3不同有机组分的提取 7.1.3.1将索氏提取或超声提取得到的提取滤液放入分液漏斗，用1mol/L盐酸提取3次，每次用量 约50～75mL(提取液pH为1~2)。 2 GB/T15440-1995 7.1.3.2碱性组分：将7.1.3.1中 3次提取所得的水相合并,用1mol/L氢氧化钠将pH调至11~12, 用二氯甲烷提取3次，每次用量约50～100mL，将3次提取的有机相合并，并使其通过无水硫酸钠除去 水分。此为碱性组分。 量约50～75mL（提取液pH为11～12)。将3次提取的有机相合并，并使其通过无水硫酸钠除去水分。 此为中性组分。 7..1. 3. 4酸性组分:将 7. 1. 3. 3中 3次提取所得的水相合并,用 1 mol/L, 盐酸将 pH 调至 1~2。用二氯 甲烷提取3次，每次用量约100mL。合并3次提取的有机相，使其通过无水硫酸钠除去水分。此为酸性 组分。 注意在提取过程中如水相、有机相间的乳化层超过有机相的1/3，应使用离心等物理学方法进行分 离。 ：7.2提取液浓缩 7.1.1、7.1.2所得提取液及.7.1.3所得各有机组分提取液体积在1L以下时，可用K-D浓缩器浓 缩，如提取液体积大于1L，使用旋转蒸发器，将提取液蒸发至近100mL，用K-D浓缩器浓缩。留出 50%浓缩后的提取液以备重量分析及化学分析，另外50%继续用K-D浓缩器浓缩至1mL。 7.3溶剂置换 于40℃水浴条件下用平稳氮气流将浓缩过的提取液吹干。加入适量(1mL左右)DMSO或遗传毒 性检测所需的其他溶剂使萃取物溶解，并稀释至适当浓度以备进行遗传毒理学检测。 提取液应于一20℃避光保，并应在提取之日起的3周内进行检测。 8样品量计算结果的表示 8.1采气总量用m表示。 8.2可吸入颗粒物采集总量用mg表示。 8. 3提取有机物的量用mg表示。 9质量控制 SA 9.1设置现场采样及溶剂对照，即在采样期间将空白滤膜放置在现场（注意防止污染），除不参与采样 外，空白滤膜需经历从膜准备到遗传毒性检测的全过程。如此对照的遗传毒性检测呈阳性反应，应分别 检查采样过程及制备系统，找出原因，重复对照试验，至合格为止。 9.2设置阳性对照，即将在所要进行的遗传毒性检测中肯定会产生阳性结果的对照物滴加在空白滤膜 上，使其经历样品制备的全过程。如遗传毒理学检测结果为阴性，应检查制备系统，找出原因，重复阳性 对照试验，至合格为止。 10安全性 由于对样品制备中涉及的毒性与致癌性不完全清楚，应将其按有潜在健康危害的物质对待，操作者 应保持最低限度的接触。 第二篇地面水及废水样品前处理 11适用范围 本规范适用于地面水及废水中的非挥发性有机物，不适于挥发性有机物。 12定义 地面水：本规范中包括江水、河水、湖水、池塘水等。 3 GB/T15440—1995 废水：本规范中包括工业废水及生活污水等。 非水液相：本规范中为与水介质分层、主成分不是水的液相。 沉积固相：本规范中为从静置24h的废水样中分离出来的固相或半固相。 13仪器、设备 13.1采样瓶：瓶盖具聚四氟乙烯衬垫的棕色、螺口、大口玻璃瓶，或在样品无腐蚀性条件下使用具铝箱 外衬的橡皮塞。 13.2分液漏斗。 13.3贮水器：具下口的玻璃或塘瓷容器。 13.4 玻璃树脂柱:不低于 10 cm 高,柱直径与柱长比为 1 ：4~1：10 之间。 13.5输液泵。 13.6~13.11分别与4.6~4.11相同。 14试剂 14.1纯水：与5.1相同。 14.2氧氧化钠:c(NaOH)=10 mol/L。 14.31 :1(V/V)硫酸。 14.4氢氧化钠：c(NaOH)=1mol/L。 14. 5 盐酸:c(HCI)=1 mol/L。 14.6溶剂：等级不得低于分析纯，且皆应在玻璃容器中重蒸馏后方能使用。 14.6.1二氯甲烷。 14.6.2甲醇。 14.6.3丙酮。 14.6.4已烷。 14. 6. 5 二甲基亚砜(DMSO)。 14.7XAD-2树脂或等效的大孔树脂。树脂应经纯水及甲醇漂洗后，在索氏提取器中分别用甲醇、二氟 甲烷、已烷、丙酮提取8h，去除有机物。净化后的树脂浸于甲醇中，置冰箱冷藏备用。 15样品采集 手工采集适量样品放入采样瓶中，样品要完全充满容器，密封，并于2h内送至实验室，尽快进行处 理。 16样品制备 16.1有机物的分离提取 16.1.1有机物分离提取前的样品预处理 将采样瓶于4℃静置24h，使非水液相、水相、沉积固相分离。非水液相按非水液态废弃物样品制备 规范处理；沉积固相按固态废弃物样品制备规范处理。水相按下述原则处理：悬浮物重量低于5%的地 面水可直接进行有机物的大孔树脂提取；悬浮物重量高于5%地面水及废水进行有机物的液-液提取。 16.1.2有机物的液-液提取 取 2 份 1 500mL的水样分放到2 个2 000 mL分液漏斗中。用10 mol /L氢氧化钠将pH调至11。 向每个分液漏斗加入150mL二氯甲烷，振荡2min，注意放气。至少静置10min，使有机相与水相分离， 分出有机相。再各用100mL二氯甲烷提取两次。将3次提取液合并在1000mL烧瓶中。如有机相与 水相间的乳化层多于溶剂层的1/3,则可用离心等物理学方法完成两相的分