书 书 书犐犆犛 ６７ ． １００ 犆 ５３ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２２３８８ — ２００８ 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犲犾犪犿犻狀犲犻狀狉犪狑犿犻犾犽犪狀犱犱犪犻狉狔狆狉狅犱狌犮狋狊 ２００８  １０  ０７ 发布 ２００８  １０  ０７ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准包括三个方法 ： 第一法 　 高效液相色谱法 ， 第二法 　 液相色谱  质谱 ／ 质谱法 ， 第三法 　 气相 色谱  质谱联用法 。 检测时 ， 应根据检测对象及其限量的规定 ， 选用与其相适应的检测方法 。 本标准的附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由全国食品安全应急标准化工作组 、 全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会提 出并归口 。 本标准第一法起草单位 ： 中国检验检疫科学研究院 、 中国疾病预防控制中心 、 国家食品质量安全监 督检验中心 、 北京市疾病预防控制中心 、 国家乳制品质量监督检验中心 、 浙江省质量技术监督检测研究 院 、 国家加工食品质量监督检验中心 （ 广州 ）。 本标准第一法主要起草人 ： 宋书锋 、 鲁杰 、 安娟 、 杨大进 、 李淑娟 、 张晶 、 刘艳琴 、 杨红梅 、 杨金宝 、 鄂来明 、 廖上富 、 陈小珍 、 蔡依军 、 郭新东 、 吴玉銮 。 本标准第二法起草单位 ： 中国检验检疫科学研究院 、 北京市疾病预防控制中心 、 国家食品质量安全 监督检验中心 、 中国疾病预防控制中心 、 中华人民共和国江苏出入境检验检疫局 。 本标准第二法主要起草人 ： 彭涛 、 吴永宁 、 邵兵 、 王浩 、 李晓娟 、 郭启雷 、 苗虹 、 赵云峰 、 丁涛 、 李立 、 蒋原 。 本标准第三法起草单位 ： 上海市质量监督检验技术研究院 、 国家食品质量安全监督检验中心 、 中国 检验检疫科学研究院 。 本标准第三法主要起草人 ： 巢强国 、 常宇文 、 雷涛 、 陈冬东 、 赵玉琪 、 周耀斌 、 穆同娜 、 葛宇 、 曹程明 、 张辉 、 麦成华 、 曹红 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２２３８８ — ２００８ 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 １ 　 范围 本标准规定了原料乳 、 乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的三种测定方法 ， 即高效液相色谱法 （ ＨＰＬＣ 法 ）、 液相色谱  质谱 ／ 质谱法 （ ＬＣＭＳ ／ ＭＳ 法 ） 和气相色谱  质谱联用法 ［ 包括气相色谱  质谱法 （ ＧＣＭＳ 法 ）， 气相色谱  质谱 ／ 质谱法 （ ＧＣＭＳ ／ ＭＳ 法 ）］。 本标准适用于原料乳 、 乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的定量测定 ； 液相色谱  质谱 ／ 质谱法 、 气相 色谱  质谱联用法 （ 包括气相色谱  质谱 ／ 质谱法 ） 同时适用于原料乳 、 乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的 定性确证 。 本标准高效液相色谱法的定量限为 ２ｍｇ ／ ｋｇ ， 液相色谱  质谱 ／ 质谱法的定量限为 ０．０１ｍｇ ／ ｋｇ ， 气 相色谱  质谱法的定量限为 ０．０５ｍｇ ／ ｋｇ （ 其中气相色谱  质谱 ／ 质谱法的定量限为 ０．００５ｍｇ ／ ｋｇ ）。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ ， ＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ， ＭＯＤ ） ３ 　 第一法 　 高效液相色谱法 （ 犎犘犔犆 法 ） ３ ． １ 　 原理 试样用三氯乙酸溶液  乙腈提取 ， 经阳离子交换固相萃取柱净化后 ， 用高效液相色谱测定 ， 外标法 定量 。 ３ ． ２ 　 试剂与材料 除非另有说明 ， 所有试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ３ ． ２ ． １ 　 甲醇 ： 色谱纯 。 ３ ． ２ ． ２ 　 乙腈 ： 色谱纯 。 ３ ． ２ ． ３ 　 氨水 ： 含量为 ２５％ ～ ２８％ 。 ３ ． ２ ． ４ 　 三氯乙酸 。 ３ ． ２ ． ５ 　 柠檬酸 。 ３ ． ２ ． ６ 　 辛烷磺酸钠 ： 色谱纯 。 ３ ． ２ ． ７ 　 甲醇水溶液 ： 准确量取 ５０ｍＬ 甲醇和 ５０ｍＬ 水 ， 混匀后备用 。 ３ ． ２ ． ８ 　 三氯乙酸溶液 （ １％ ）： 准确称取 １０ｇ 三氯乙酸于 １Ｌ 容量瓶中 ， 用水溶解并定容至刻度 ， 混匀后 备用 。 ３ ． ２ ． ９ 　 氨化甲醇溶液 （ ５％ ）： 准确量取 ５ｍＬ 氨水和 ９５ｍＬ 甲醇 ， 混匀后备用 。 ３ ． ２ ． １０ 　 离子对试剂缓冲液 ： 准确称取 ２．１０ｇ 柠檬酸和 ２．１６ｇ 辛烷磺酸钠 ， 加入约 ９８０ｍＬ 水溶解 ， 调 节 ｐＨ 至 ３．０ 后 ， 定容至 １Ｌ 备用 。 ３ ． ２ ． １１ 　 三聚氰胺标准品 ： ＣＡＳ１０８７８０１ ， 纯度大于 ９９．０％ 。 ３ ． ２ ． １２ 　 三聚氰胺标准储备液 ： 准确称取 １００ｍｇ （ 精确到 ０．１ｍｇ ） 三聚氰胺标准品于 １００ｍＬ 容量瓶 中 ， 用甲醇水溶液 （ ３．２．７ ） 溶解并定容至刻度 ， 配制成浓度为 １ｍｇ ／ ｍＬ 的标准储备液 ， 于 ４℃ 避光 保存 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２２３８８ — ２００８ ３ ． ２ ． １３ 　 阳离子交换固相萃取柱 ： 混合型阳离子交换固相萃取柱 ， 基质为苯磺酸化的聚苯乙烯  二乙烯 基苯高聚物 ， 填料质量为 ６０ｍｇ ， 体积为 ３ｍＬ ， 或相当者 。 使用前依次用 ３ｍＬ 甲醇 、 ５ｍＬ 水活化 。 ３ ． ２ ． １４ 　 定性滤纸 。 ３ ． ２ ． １５ 　 海砂 ： 化学纯 ， 粒度 ０．６５ｍｍ ～ ０．８５ｍｍ ， 二氧化硅 （ ＳｉＯ ２ ） 含量为 ９９％ 。 ３ ． ２ ． １６ 　 微孔滤膜 ： ０．２ μ ｍ ， 有机相 。 ３ ． ２ ． １７ 　 氮气 ： 纯度大于等于 ９９．９９９％ 。 ３ ． ３ 　 仪器和设备 ３ ． ３ ． １ 　 高效液相色谱 （ ＨＰＬＣ ） 仪 ： 配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。 ３ ． ３ ． ２ 　 分析天平 ： 感量为 ０．０００１ｇ 和 ０．０１ｇ 。 ３ ． ３ ． ３ 　 离心机 ： 转速不低于 ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ３ ． ３ ． ４ 　 超声波水浴 。 ３ ． ３ ． ５ 　 固相萃取装置 。 ３ ． ３ ． ６ 　 氮气吹干仪 。 ３ ． ３ ． ７ 　 涡旋混合器 。 ３ ． ３ ． ８ 　 具塞塑料离心管 ： ５０ｍＬ 。 ３ ． ３ ． ９ 　 研钵 。 ３ ． ４ 　 样品处理 ３ ． ４ ． １ 　 提取 ３ ． ４ ． １ ． １ 　 液态奶 、 奶粉 、 酸奶 、 冰淇淋和奶糖等 称取 ２ｇ （ 精确至 ０．０１ｇ ） 试样于 ５０ｍＬ 具塞塑料离心管中 ， 加入 １５ｍＬ 三氯乙酸溶液 （ ３．２．８ ） 和 ５ｍＬ 乙腈 ， 超声提取 １０ｍｉｎ ， 再振荡提取 １０ｍｉｎ 后 ， 以不低于 ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ｍｉｎ 。 上清液经三氯 乙酸溶液润湿的滤纸过滤后 ， 用三氯乙酸溶液定容至 ２５ｍＬ ， 移取 ５ｍＬ 滤液 ， 加入 ５ｍＬ 水混匀后做待 净化液 。 ３ ． ４ ． １ ． ２ 　 奶酪 、 奶油和巧克力等 称取 ２ｇ （ 精确至 ０．０１ｇ ） 试样于研钵中 ， 加入适量海砂 （ 试样质量的 ４ 倍 ～ ６ 倍 ） 研磨成干粉状 ， 转 移至 ５０ｍＬ 具塞塑料离心管中 ， 用 １５ｍＬ 三氯乙酸溶液 （ ３．２．８ ） 分数次清洗研钵 ， 清洗液转入离心管 中 ， 再往离心管中加入 ５ｍＬ 乙腈 ， 余下操作同 ３．４．１．１ 中 “ 超声提取 １０ｍｉｎ ，…… 加入 ５ｍＬ 水混匀后 做待净化液 ”。 注 ： 若样品中脂肪含量较高 ， 可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液  液分配除脂后再用 ＳＰＥ 柱净化 。 ３ ． ４ ． ２ 　 净化 将 ３．４．１ 中的待净化液转移至固相萃取柱 （ ３．２．１３ ） 中 。 依次用 ３ｍＬ 水和 ３ｍＬ 甲醇洗涤 ， 抽至近 干后 ， 用 ６ｍＬ 氨化甲醇溶液 （ ３．２．９ ） 洗脱 。 整个固相萃取过程流速不超过 １ｍＬ ／ ｍｉｎ 。 洗脱液于 ５０℃ 下用氮气吹干 ， 残留物 （ 相当于 ０．４ｇ 样品 ） 用 １ｍＬ 流动相定容 ， 涡旋混合 １ｍｉｎ ， 过微孔滤膜 （ ３．２．１６ ） 后 ， 供 ＨＰＬＣ 测定 。 ３ ． ５ 　 高效液相色谱测定 ３ ． ５ ． １ 　 犎犘犔犆 参考条件 ａ ） 　 色谱柱 ： Ｃ ８ 柱 ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ ［ 内径 （ ｉ．ｄ． ）］， ５ μ ｍ ， 或相当者 。 Ｃ １８ 柱 ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ ［ 内径 （ ｉ．ｄ． ）］， ５ μ ｍ ， 或相当者 。 ｂ ） 　 流动相 ： Ｃ ８ 柱 ， 离子对试剂缓冲液 （ ３．２．１０ ）  乙腈 （ ８５＋１５ ， 体积比 ）， 混匀 。 Ｃ １８ 柱