书 书 书犐犆犛 ８７ ． ０４０ 犌 ５０ 　 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２１８６６ — ２００８ 抗菌涂料 （ 漆膜 ） 抗菌性测定法和抗菌效果 犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱犪狀犱犲犳犳犲犮狋犳狅狉犪狀狋犻犫犪犮狋犲狉犻犪犾犮犪狆犪犫犻犾犻狋狔狅犳狆犪犻狀狋狊犳犻犾犿 ２００８  ０５  １４ 发布 ２００８  １０  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准由中国石油和化学工业协会提出 。 本标准由全国涂料和颜料标准化技术委员会归口 。 本标准起草单位 ： 中国建筑材料科学研究总院 、 中化建常州涂料化工研究院 、 广东省微生物分析检 测中心 、 深圳市立新纳米应用技术有限公司 、 奥麒化工 （ 中国 ） 有限公司 、 上海富臣化工有限公司 、 深圳市 展辰达化工有限公司 、 北京展辰化工有限公司 、 华夏贝能 （ 北京 ） 生态科技有限公司 、 广东巴德士化工有 限公司 、 深圳方浩实业有限公司 。 本标准主要起草人 ： 王静 、 冀志江 、 赵玲 、 陈仪本 、 曹文 、 刘伟 、 叶荣森 、 朱胜美 、 严修才 、 陈延东 、 王继梅 、 丁楠 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２１８６６ — ２００８ 抗菌涂料 （ 漆膜 ） 抗菌性测定法和抗菌效果 １ 　 范围 本标准规定了建筑和木器用抗菌涂料 （ 漆膜 ） 抗细菌性能的测定方法及抗细菌效果 。 其他涂料 （ 漆膜 ） 抗细菌性能的测定也可参照使用 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ１２５０ 　 极限数值的表示方法和判定方法 ＧＢ ／ Ｔ１７２７ 　 漆膜一般制备法 ＧＢ ／ Ｔ３１８６ 　 色漆 、 清漆和色漆与清漆用原材料 　 取样 （ ＧＢ ／ Ｔ３１８６ — ２００６ ， ＩＳＯ１５５２８ ： ２０００ ， ＩＤＴ ） ＧＢ ／ Ｔ４７８９．２ 　 食品卫生微生物学检验 　 菌落总数测定 ＧＢ ／ Ｔ９２７８ 　 涂料试样状态调节和试验的温湿度 （ ＧＢ ／ Ｔ９２７８ — ２００８ ， ＩＳＯ３２７０ ： １９８４ ， ＩＤＴ ） ＧＢ１９２５８ 　 紫外线杀菌灯 ＧＢ１９４８９ 　 实验室 　 生物安全通用要求 ３ 　 术语和定义 ３ ． １ 抑菌 　 犫犪犮狋犲狉犻狅狊狋犪狊犻狊 抑制细菌 、 真菌 、 霉菌等微生物生长繁殖的作用 。 ３ ． ２ 杀菌 　 狊狋犲狉犻犾犻狕犪狋犻狅狀 杀死细菌 、 真菌 、 霉菌等微生物营养体和繁殖体的作用 。 ３ ． ３ 抗菌 　 犪狀狋犻犫犪犮狋犲狉犻犪犾 抑菌和杀菌作用的总称 。 ３ ． ４ 抗菌涂料 　 犪狀狋犻犫犪犮狋犲狉犻犪犾犮狅犪狋犻狀犵 具有抗菌作用的涂料 。 ４ 　 方法简述 本方法通过定量接种细菌于待检验样板上 ， 用贴膜的方法使细菌均匀接触样板 ， 经过一定时间的培 养后 ， 检测样板中的活菌数 ， 并计算出样板的抗细菌率 。 ５ 　 试验条件 ５ ． １ 　 实验室要求 抗菌试验的实验室应符合 ＧＢ１９４８９ 规定的实验室生物安全管理和设施条件要求 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２１８６６ — ２００８ ５ ． ２ 　 主要设备 ５ ． ２ ． １ 　 恒温培养箱 （ ３７±１ ） ℃ 、 冷藏箱 （ ０ ～ ５ ） ℃ 、 超净工作台 、 压力蒸汽灭菌锅 、 电热干燥箱 、 天平 （ 精度 ０．０１ｇ ）。 ５ ． ２ ． ２ 　 灭菌平皿 、 灭菌试管 、 灭菌移液管 、 接种环 、 酒精灯 。 ５ ． ３ 　 主要材料 ５ ． ３ ． １ 　 覆盖膜 聚乙烯薄膜 ， 标准尺寸为 （ ４０±２ ） ｍｍ× （ ４０±２ ） ｍｍ 、 厚度为 （ ０．０５ ～ ０．１０ ） ｍｍ 。 用 ７０％ 乙醇溶液浸 泡 １０ｍｉｎ ， 再用洗脱液冲洗 ， 自然干燥 。 ５ ． ３ ． ２ 　 培养基 ５ ． ３ ． ２ ． １ 　 营养肉汤培养基 （ 犖犅 ） 　　　 牛肉膏 　　　　　 ５．０ｇ 　　　 蛋白胨 　 １０．０ｇ 　　　 氯化钠 ５．０ｇ 制法 ： 取上述市售材料按比例依次加入 １０００ｍＬ 蒸馏水中 ， 加热溶解后 ， 用 ０．１ｍｏｌ ／ ＬＮａＯＨ 溶 液 （ 分析纯 ） 调节 ｐＨ 值为 ７．０ ～ ７．２ ， 分装后置压力蒸汽灭菌器内 ， １２１℃ 灭菌 ３０ｍｉｎ 。 ５ ． ３ ． ２ ． ２ 　 营养琼脂培养基 （ 犖犃 ） １０００ｍＬ 营养肉汤 （ ＮＢ ） 中加入 １５ｇ 琼脂 ， 加热熔化 ， 用 ０．１ｍｏｌ ／ ＬＮａＯＨ 溶液调节 ｐＨ 值为 ７．０ ～ ７．２ ， 分装后置压力蒸汽灭菌器内 ， １２１℃ 灭菌 ３０ｍｉｎ 。 ５ ． ３ ． ３ 　 试剂 ５ ． ３ ． ３ ． １ 　 消毒剂 ７０％ 乙醇溶液 。 ５ ． ３ ． ３ ． ２ 　 洗脱液 含 ０．８５％ＮａＣｌ 的生理盐水 。 为便于洗脱可加入 ０．２％ 无菌表面活性剂 （ 如吐温 ８０ ）。 用 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ ＮａＯＨ 溶液或 ０．１ｍｏｌ ／ ＬＨＣｌ 溶液调节 ｐＨ 值为 ７．０ ～ ７．２ ， 分装后置压力蒸汽灭菌器内 ， １２１℃ 灭菌 ３０ｍｉｎ 。 ５ ． ３ ． ３ ． ３ 　 培养液 营养肉汤 （ ＮＢ ）／ 生理盐水溶液 。 建议用于大肠杆菌的培养液浓度为 １ ／ ５００ ， 金黄色葡萄球菌的培 养液浓度为 １ ／ １００ 。 为便于细菌分散可加入 ０．２％ 无菌表面活性剂 （ 如吐温 ８０ ）。 用 ０．１ｍｏｌ ／ ＬＮａＯＨ 溶液或 ０．１ｍｏｌ ／ ＬＨＣｌ 溶液调节 ｐＨ 值为 ７．０ ～ ７．２ ， 分装后置压力蒸汽灭菌器内 ， １２１℃ 灭菌 ３０ｍｉｎ 。 ５ ． ３ ． ４ 　 检验菌种 ａ ） 　 金黄色葡萄球菌 （ 犛狋犪狆犺狔犾狅犮狅犮犮狌狊犪狌狉犲狌狊 ） ＡＳ１．８９ ｂ ） 　 大肠埃希氏菌 （ 犈狊犮犺犲狉犻犮犺犻犪犮狅犾犻 ） ＡＳ１．９０ 根据产品的使用要求 ， 可增加选用其他菌种作为检验菌种 。 注 ： 实验用菌种应来源于国家级菌种保藏管理中心 。 ５ ． ４ 　 样板 ５ ． ４ ． １ 　 阴性对照样板 编号 Ａ ， 是未放任何试板的直径为 ９０ｍｍ 或 １００ｍｍ 的灭菌培养平皿中 ５０ｍｍ×５０ｍｍ 面积大小 的空板 。 ５ ． ４ ． ２ 　 空白对照样板 编号 Ｂ ， 是未添加抗菌成分的涂料试板 ， 此对照涂料样品要求不含有任何无机或有机抗菌剂 、 防霉 剂 、 防腐剂 。 注 ： 空白对照样板可在中国建筑材料科学研究总院得到 。 ５ ． ４ ． ３ 　 抗菌涂料试验样板 编号 Ｃ ， 是添加抗菌成分的涂料试板 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２１８６６ — ２００８ ５ ． ４ ． ４ 　 涂料试板制备 按 ＧＢ ／ Ｔ３１８６ 的规定进行取样 。 制备试板所用底材通常应是实际使用底材 （ 例如水泥板 、 木板 、 金 属板 、 塑料板 、 贴膜纸板 ）。 按照 ＧＢ ／ Ｔ１７２７ 要求制作涂膜 ， 涂料的施涂一般为两次涂刷 ， 第一遍表干后 涂刷第二遍 ， 涂膜总厚度湿膜小于 １００ μ ｍ ， 样板应平整 、 无锈 、 无油污等 。 若以木板作为试板底材 ， 则要 求漆膜封住整个木板 。 试板涂刷后按照 ＧＢ ／ Ｔ９２７８ 规定的条件干燥 ７ｄ ， 保证试板涂膜完全干后再用 于实验 。 将涂刷好的试板裁成 ５０ｍｍ×５０ｍｍ 大小的试板 １０ 片 ， 在试验前应进行消毒 ， 建议用超净工作台 中紫外灭菌灯消毒处理试板 ５ｍｉｎ ， 备用 。 ６ 　 检验程序 ６ ． １ 　 菌种保藏 将菌种接种于营养琼脂培养基 （ ＮＡ ） 斜面上 ， 在 （ ３７±１ ） ℃ 下培养 ２４ｈ 后 ， 在 （ ０ ～ ５ ） ℃ 下保藏 （ 不得 超过 １ 个月 ）， 作为斜面保藏菌种 。 ６ ． ２ 　 菌种活化 使用保藏时间不超过 ２ 周的菌种 ， 将斜面保藏菌种转接到平板营养琼脂培养基上 ， 在 （ ３７±１ ） ℃ 下 培养 （ １８ ～ ２０ ） ｈ ， 试验时应采用连续转接 ２ 次后的新鲜细菌培养物 （ ２４ｈ 内转接的 ）。 ６ ． ３ 　 菌悬液制备 用接种环从 ６．２ 培养基上取少量 （ 刮 １ ～ ２ 环 ） 新鲜细菌 ， 加入培养液中 ， 并依次做 １０ 倍递增稀释 液 ， 选择浓度为 （ ５．０ ～ １０．０ ） ×１０ ５ ｃｆｕ ／ ｍＬ 的菌液作为接种菌液 ， 按 ＧＢ ／ Ｔ４７８９．２ 的方法操作 。 ６ ． ４ 　 样品试验 分别取 ０．４ｍＬ ～ ０．５ｍＬ 试验用菌液 （ ６．３ ） 滴加在阴性对照样板 （ Ａ ）、 空白对照样板 （ Ｂ ） 和抗菌涂 料样板 （ Ｃ ） 上 。 用灭菌镊子夹起灭菌覆盖膜分别覆盖在样 （ Ａ ）、 样 （ Ｂ ） 和样 （ Ｃ ） 上 ， 一定要铺平且无气泡 ， 使菌均匀 接触样品 ， 置于灭菌平皿中 ， 在 （ ３７±１ ） ℃ 、 相对湿度 ＲＨ ＞ ９０％ 条件下培养 ２４ｈ 。 每个样品做 ３ 个平行 试验 。 取出培养 ２４ｈ 的样品 ， 分别加入 ２０ｍＬ 洗液 ， 反复洗样 （ Ａ ）、 样 （