书 书 书犐犆犛 ６７ ． １２０ 犡 ０４ 　 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２１３２４ — ２００７ 食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物 残留量检测方法 犕犲狋犺狅犱犳狅狉狋犺犲犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫犲狀狕犻犿犻犱犪狕狅犾犲狊狉犲狊犻犱狌犲狊 犻狀犲犱犻犫犾犲犪狀犻犿犪犾犿狌狊犮犾犲犪狀犱犾犻狏犲狉 ２００７  １０  ２９ 发布 ２００８  ０４  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 、 附录 Ｃ 、 附录 Ｄ 均为资料性附录 。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中华人民共和国广东出入境检验检疫局 、 中国检验检疫科学研究院 。 本标准主要起草人 ： 林峰 、 林海丹 、 吴映璇 、 张美金 、 谢守新 、 彭涛 、 李晓娟 、 邵琳智 、 邱月明 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２１３２４ — ２００７ 食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物 残留量检测方法 １ 　 范围 本标准规定了食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物和代谢物残留量的液相色谱  串联质谱检测 方法和液相色谱检测方法 。 本标准适用于液相色谱法和液相色谱  串联质谱法测定鸡肉 、 牛肉 、 猪肉 、 鸡肝 、 牛肝 、 猪肝中奥芬达 唑 、 芬苯达唑及它们的代谢物奥芬达唑砜 ， 阿苯达唑及其代谢物阿苯达唑 ２ 氨基砜 、 阿苯达唑亚砜和阿 苯达唑砜 ， 甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑 ， 氟苯咪唑及其代谢物 ２ 氨基氟苯咪唑 ， 噻苯咪唑及其代谢物 ５ 羟基噻苯咪唑 ， 噻苯咪唑酯残留量 。 适用于液相色谱  串联质谱法测定鸡肉 、 牛 肉 、 猪肉 、 鸡肝 、 牛肝 、 猪肝中丙氧苯咪唑残留量 。 适用于液相色谱法测定鸡肉 、 牛肉 、 猪肉 、 鸡肝 、 牛肝中 丙氧苯咪唑残留量 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — １９９２ ， ｎｅｑＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ） ３ 　 方法提要 试样在碱性条件下以乙酸乙酯提取 、 离心 、 浓缩后残渣以乙腈 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 盐酸溶解 ， 正己烷脱脂 ， 经固相萃取柱净化 ， 液相色谱  串联质谱仪或高效液相色谱仪测定 ， 外标峰面积法定量 。 ４ 　 试剂和材料 除另有说明外 ， 所用试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ４ ． １ 　 乙酸乙酯 。 ４ ． ２ 　 正己烷 。 ４ ． ３ 　 甲醇 ： 液相色谱级 。 ４ ． ４ 　 乙腈 ： 液相色谱级 。 ４ ． ５ 　 无水硫酸钠 ： 经 ６５０℃ 灼烧 ４ｈ ， 置于干燥器内备用 。 ４ ． ６ 　 ＢＨＴ （ ２ ， ６ 二叔丁基对甲酚 ）。 ４ ． ７ 　 盐酸 。 ４ ． ８ 　 氢氧化钾 。 ４ ． ９ 　 ２５％ 氨水 。 ４ ． １０ 　 甲酸 ： 优级纯 。 ４ ． １１ 　 乙酸胺 。 ４ ． １２ 　 １％ＢＨＴ 溶液 ： 称取 １．０ｇＢＨＴ ， 乙酸乙酯溶解并稀释至 １００ｍＬ ， 临用前配制 。 ４ ． １３ 　 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 盐酸 ： 量取浓盐酸 ８．３ｍＬ ， 加水稀释至 １０００ｍＬ 。 ４ ． １４ 　 ０．００５ｍｏｌ ／ Ｌ 甲酸 ： 准确吸取 １８８ μ Ｌ 甲酸 ， 加水稀释至 １０００ｍＬ 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２１３２４ — ２００７ ４ ． １５ 　 ５０％ 氢氧化钾溶液 ： ５０ｇ 氢氧化钾溶解于 １００ｍＬ 水中 ， 冷却至室温后待用 。 ４ ． １６ 　 １０％ 氨乙腈溶液 ： 量取 １０ｍＬ２５％ 氨水 ， 乙腈稀释至 １００ｍＬ ， 临用前配制 。 ４ ． １７ 　 ０．０２５ｍｏｌ ／ Ｌ 乙酸铵 ： １．９３ｇ 乙酸铵溶解于 １０００ｍＬ 水中 。 ４ ． １８ 　 标准品 ： 奥芬达唑 （ ｏｘｆｅｎｄａｚｏｌｅ ， ＣＡＳ 号 ５３７１６５００ ）、 芬苯达唑 （ ｆｅｎｂｅｎｄａｚｏｌｅ ， ＣＡＳ 号 ４３２１０６７９ ）、 奥 芬达唑砜 （ ｏｘｆｅｎｄａｚｏｌｅｓｕｌｆｏｎｅ ， ＣＡＳ 号 ５４０２９２０８ ）、 阿苯达唑 （ ａｌｂｅｎｄａｚｏｌｅ ， ＣＡＳ 号 ５４９６５２１８ ）、 阿苯达 唑 ２ 氨基砜 （ ａｌｂｅｎｄａｚｏｌｅ２ａｍｉｎｏｓｕｌｆｏｎｅ ， ＣＡＳ 号 ８０９８３３４２ ）、 阿苯达唑亚砜 （ ａｌｂｅｎｄａｚｏｌｅｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ， ＣＡＳ 号 ５４０２９１２８ ）、 阿苯达唑砜 （ ａｌｂｅｎｄａｚｏｌｅｓｕｌｆｏｎｅ ， ＣＡＳ 号 ７５１８４７１３ ）、 甲苯咪唑 （ ｍｅｂｅｎｄａｚｏｌｅ ， ＣＡＳ 号 １４７９８０００ ）、 氨基甲苯咪唑 （ ｍｅｂｅｎｄａｚｏｌｅａｍｉｎｅ ， ＣＡＳ 号 ５２３２９６０９ ）、 羟基甲苯咪唑 （ ５ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｂｅｎｄａｚｏｌｅ ， ＣＡＳ 号 ６０２５４９５７ ）、 氟苯咪唑 （ ｆｌｕｂｅｎｄａｚｏｌｅ ， ＣＡＳ 号 １３６７８０００ ）、 ２ 氨基氟苯 咪唑 （ ２ａｍｉｎｏｆｌｕｂｅｎｄａｚｏｌｅ ）、 噻苯咪唑 （ ｔｈｉａｂｅｎｄａｚｏｌｅ ， ＣＡＳ 号 １４８７９８ ）、 噻苯咪唑酯 （ ｃａｍｂｅｎｄａｚｏｌｅ ， ＣＡＳ 号 ２６０９７８０３ ）、 丙氧苯咪唑 （ ｏｘｉｂｅｎｄａｚｏｌｅ ， ＣＡＳ 号 ２０５５９５５１ ） 标准品 ， 含量均在 ９８％ 以上 ， ５ 羟 基噻苯咪唑 （ ｔｈｉａｂｅｎｄａｚｏｌｅ５ｈｙｄｒｏｘｙ ， ＣＡＳ 号 １７４５０５００ ） 标准溶液浓度为 １０ｍｇ ／ Ｌ 。 ４ ． １９ 　 标准储备液 准确称取奥芬达唑 、 芬苯达唑 、 奥芬达唑砜 、 阿苯达唑 、 阿苯达唑 ２ 氨基砜 、 阿苯达唑亚砜 、 阿苯达 唑砜 、 甲苯咪唑 、 氨基甲苯咪唑 、 羟基甲苯咪唑 、 氟苯咪唑 、 ２ 氨基氟苯咪唑 、 噻苯咪唑 、 噻苯咪唑酯 、 丙氧 苯咪唑标准品各 １０．０ｍｇ ， 分别用甲醇溶解并定容至 １００ｍＬ ， 配成标准储备溶液 ， 浓度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ 。 ４ ． ２０ 　 混合标准工作溶液 根据需要 ， 用乙腈  水 （ ２＋８ ， 体积比 ） 将标准储备液 （ ４．１９ ） 及 ５ 羟基噻苯咪唑标准溶液配成供液相色谱 测定用的浓度为 ０ 、 ２５．０ 、 ５０．０ 、 １００ 、 ２００ 、 ２５０ μ ｇ ／ Ｌ 的混合标准工作溶液 ， 供液相色谱  串联质谱测定用的浓 度为 ０ 、 ２．００ 、 ５．００ 、 １０．０ 、 ２０．０ 、 ４０．０ μ ｇ ／ Ｌ 的混合标准工作溶液 。 混合标准工作溶液使用前配制 。 ４ ． ２１ 　 固相萃取柱 ： ＭＣＸ 固相萃取柱或相当者 ， １５０ｍｇ ， ６ｍＬ 。 使用前依次用 ５ｍＬ 甲醇活化 、 ５ｍＬ ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 盐酸平衡 。 ４ ． ２２ 　 滤膜 ： ０．２０ μ ｍ ， ０．４５ μ ｍ ， 有机相 。 ５ 　 仪器 ５ ． １ 　 液相色谱  串联质谱仪 ： 配有电喷雾离子源 。 ５ ． ２ 　 液相色谱仪 ： 配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。 ５ ． ３ 　 均质器 。 ５ ． ４ 　 涡旋振荡器 。 ５ ． ５ 　 离心机 ： 转速大于或等于 ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ５ ． ６ 　 减压旋转蒸发仪 。 ５ ． ７ 　 超声波水浴 。 ５ ． ８ 　 分析天平 ： 感量 ０．１ｍｇ ， ０．０１ｇ 。 ６ 　 制样方法 制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化 。 从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约 ５００ｇ ， 用组织捣碎机充分捣碎均匀 ， 装入洁净容 器中 ， 密封 ， 并标明标记 ， 于 －１８℃ 以下冷冻存放 。 ７ 　 分析步骤 ７ ． １ 　 提取 称取 ５ｇ 样品 （ 准确至 ０．０１ｇ ）， 于 ５０ｍＬ 离心管中 ， 加入 ２０ｍＬ 乙酸乙酯 、 ０．１５ｍＬ５０％ 氢氧化钾 （ ４．１５ ） 溶液和 １ｍＬ１％ＢＨＴ 溶液 （ ４．１２ ） 置超声波水浴中振荡 ５ｍｉｎ ， 加入 １ｇ 无水硫酸钠 ， 均质器上 ２ 犌犅 ／ 犜 ２１３２４ — ２００７ 以 １４０００ｒ ／ ｍｉｎ 速度匀质提取 ３０ｓ ， ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ５ｍｉｎ ， 清液转移至 １００ｍＬ 梨形瓶中 ； 另取一离 心管 ， 加入 ２０ｍＬ 乙酸乙酯 、 ０．１５ｍＬ５０％ 氢氧化钾溶液和 １ｍＬ１％ＢＨＴ 溶液洗涤均质器刀头 ； 用玻 棒捣碎离心管中的沉淀 ， 加入上述洗涤均质器刀头的碱性乙酸乙酯溶液 ， 在涡旋振荡器上振荡 ２ｍｉｎ ， 置超声波水浴中振荡 ５ｍｉｎ ， ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ５ｍｉｎ ， 清液合并至 １００ｍＬ 梨形瓶中 ， ３８℃ 减压旋转蒸发 至干 。 ７ ． ２ 　 净化 上述残渣立即用 １．５ｍＬ 乙