书 书 书犐犆犛 ６７ ． １２０ 犡 ０４ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２１３１４ — ２００７ 动物源性食品中头孢匹林 、 头孢噻呋 残留量检测方法 液相色谱  质谱 ／ 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犮犲狆犺犪狆犻狉犻狀犪狀犱犮犲犳狋犻狅犳狌狉狉犲狊犻犱狌犲狊 犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀 — 犔犆犕犛 ／ 犕犛犿犲狋犺狅犱 ２００７  １０  ２９ 发布 ２００８  ０４  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准附录 Ａ 、 附录 Ｂ 、 附录 Ｃ 为资料性附录 。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局 、 中国检验检疫科学研究院 。 本标准主要起草人 ： 李一尘 、 林维宣 、 唐英章 、 田苗 、 彭涛 、 于灵 、 隋凯 、 杨春光 、 王宏伟 。 本标准为首次发布 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２１３１４ — ２００７ 动物源性食品中头孢匹林 、 头孢噻呋 残留量检测方法 液相色谱  质谱 ／ 质谱法 １ 　 范围 本标准规定了动物源性食品中头孢匹林 、 头孢噻呋残留量液相色谱  质谱 ／ 质谱测定和确证方法 。 本标准适用于动物肌肉 、 肝脏 、 肾脏 、 鸡蛋和牛奶中头孢匹林 （ ｃｅｐｈａｐｉｒｉｎ ）、 头孢噻呋 （ ｃｅｆｔｉｏｆｕｒ ） 残 留量的检测 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — １９９２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ｎｅｑＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ） ３ 　 原理 样品中头孢匹林 、 头孢噻呋残留物用乙腈  水溶液提取 ， 提取液经浓缩后 ， 用缓冲溶液溶解 ， 固相萃 取小柱净化 ， 洗脱液经氮气吹干后 ， 用液相色谱  质谱 ／ 质谱测定 ， 外标法定量 。 ４ 　 试剂和材料 除另有说明外 ， 所用试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — １９９２ 规定的一级水 。 ４ ． １ 　 乙腈 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ２ 　 甲醇 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ３ 　 甲酸 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ４ 　 氯化钠 。 ４ ． ５ 　 氢氧化钠 。 ４ ． ６ 　 磷酸二氢钾 。 ４ ． ７ 　 磷酸氢二钾 。 ４ ． ８ 　 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 氢氧化钠 ： 称取 ４ｇ 氢氧化钠 ， 并用水稀释至 １０００ｍＬ 。 ４ ． ９ 　 乙腈 ＋ 水 （ １５＋２ ， 体积比 ）。 ４ ． １０ 　 乙腈 ＋ 水 （ ３０＋７０ ， 体积比 ）。 ４ ． １１ 　 ０．０５ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸盐缓冲溶液 （ ｐＨ＝８．５ ）： 称取 ８．７ｇ 磷酸氢二钾 ， 超纯水溶解 ， 稀释至 １０００ｍＬ ， 用磷酸二氢钾调节 ｐＨ 值至 ８．５±０．１ 。 ４ ． １２ 　 ０．０２５ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸盐缓冲溶液 （ ｐＨ＝７．０ ）： 称取 ３．４ｇ 磷酸二氢钾 ， 超纯水溶解 ， 稀释至 １０００ｍＬ ， 用氢氧化钠调节 ｐＨ 值至 ７．０±０．１ 。 ４ ． １３ 　 ０．０１ｍｏｌ ／ Ｌ 乙酸铵溶液 （ ｐＨ＝４．５ ）： 称取 ０．７７ｇ 乙酸铵 ， 超纯水溶解 ， 稀释至 １０００ｍＬ ， 用甲酸 调节 ｐＨ 值至 ４．５±０．１ 。 ４ ． １４ 　 头孢匹林 、 头孢噻呋标准品 ： 纯度均大于等于 ９５％ 。 ４ ． １５ 　 头孢匹林 、 头孢噻呋标准储备溶液 ： 分别称取适量标准品 （ ４．１４ ）， 分别用乙腈水溶液 （ ４．１０ ） 溶解 １ 犌犅 ／ 犜 ２１３１４ — ２００７ 定容至 １００ｍＬ ， 溶液浓度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ ， 置于 －１８℃ 冰箱避光保存 ， 保存期 ５ｄ 。 ４ ． １６ 　 头孢匹林 、 头孢噻呋混合标准中间液 ： 分别吸取适量标准储备液 （ ４．１５ ） 于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用 磷酸盐缓冲溶液 （ ４．１２ ） 定容至刻度 ， 配成混合标准中间液 。 混合标准中间液中头孢匹林 、 头孢噻呋的浓 度分别为 １００ｎｇ ／ ｍＬ 、 ５０００ｎｇ ／ ｍＬ 。 置于 －４℃ 冰箱避光保存 ， 保存期 ５ｄ 。 ４ ． １７ 　 混合标准工作液 ： 精密量取混合标准中间溶液 （ ４．１６ ） 适量 ， 用空白样品基质配制成不同浓度系 列的混合标准工作溶液 （ 用时现配 ）。 ４ ． １８ 　 固相萃取 Ｃ １８ 柱 ： ５００ｍｇ ， ６ｍＬ 。 使用前用甲醇和水预处理 ， 即先用 ２ｍＬ 甲醇淋洗小柱 ， 然后用 １ｍＬ 水淋洗小柱 。 ５ 　 仪器 ５ ． １ 　 液相色谱  质谱 ／ 质谱仪 ： 配有电喷雾离子源 。 ５ ． ２ 　 旋转蒸发器 。 ５ ． ３ 　 固相萃取装置 。 ５ ． ４ 　 离心机 。 ５ ． ５ 　 均质器 。 ５ ． ６ 　 旋涡混合器 。 ５ ． ７ 　 ｐＨ 计 。 ５ ． ８ 　 氮吹仪 。 ６ 　 试样制备与保存 取代表性样品 ， 用组织捣碎机充分捣碎 ， 装入洁净容器中 ， 密封 ， 并标明标记 ， 于 －１８℃ 以下冷冻 存放 。 ７ 　 检测步骤 ７ ． １ 　 提取 ７ ． １ ． １ 　 肝脏 、 肾脏 、 肌肉组织 、 鸡蛋样品 称取约 ５ｇ 试样 （ 精确到 ０．０１ｇ ） 于 ５０ｍＬ 离心管中 ， 加入 １５ｍＬ 乙腈水溶液 （ ４．９ ）， 均质 ３０ｓ ， ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ５ｍｉｎ ， 上清液转移至 ５０ｍＬ 离心管中 ； 另取一离心管 ， 加入 １０ｍＬ 乙腈水溶液 （ ４．９ ）， 洗涤均质器刀头 ， 用玻棒捣碎离心管中的沉淀 ， 加入上述洗涤均质器刀头溶液 ， 在旋涡混合器上振荡 １ｍｉｎ ， ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ５ｍｉｎ ， 上清液合并至 ５０ｍＬ 离心管中 ， 重复用 １０ｍＬ 乙腈水溶液 （ ４．９ ） 洗涤刀 头并提取一次 ， 上清液合并至 ５０ｍＬ 离心管中 ， 用乙腈水溶液 （ ４．９ ） 定容至 ４０ｍＬ 。 准确移取 ２０ｍＬ 入 １００ｍＬ 鸡心瓶 。 ７ ． １ ． ２ 　 牛奶样品 称取 １０ｇ 样品 （ 精确到 ０．０１ｇ ） 于 ５０ｍＬ 离心管中 ， 加入 ２０ｍＬ 乙腈 （ ４．９ ）， 均质提取 ３０ｓ ， ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ５ｍｉｎ ， 上清液转移至 ５０ｍＬ 离心管中 ； 另取一离心管 ， 加入 １０ｍＬ 乙腈水溶液 （ ４．９ ）， 洗涤均质器刀头 ， 用玻棒捣碎离心管中的沉淀 ， 加入上述洗涤均质器刀头溶液 ， 在旋涡混合器上振荡 １ｍｉｎ ， ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ５ｍｉｎ ， 上清液合并至 ５０ｍＬ 离心管中 ， 重复用 １０ｍＬ 乙腈水溶液 （ ４．９ ） 洗涤刀 头并提取一次 ， 上清液合并至 ５０ｍＬ 离心管中 ， 用乙腈水溶液 （ ４．９ ） 定容至 ５０ｍＬ 。 准确移取 ２５ｍＬ 入 １００ｍＬ 鸡心瓶 。 将鸡心瓶于旋转蒸发器上 （ ３７℃ 水浴 ） 蒸发除去乙腈 （ 易起沫样品可加入 ４ｍＬ 饱和氯化钠溶液 ）。 ７ ． ２ 　 净化 立即向已除去乙腈的鸡心瓶中加入 ２５ｍＬ 磷酸盐缓冲溶液 （ ４．１１ ）， 涡旋混匀 １ｍｉｎ ， 用 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 氢氧化钠调节 ｐＨ 值为 ８．５ ， 以 １ｍＬ ／ ｍｉｎ 的速度通过经过预处理的固相萃取柱 ， 先用 ２ｍＬ 磷酸盐缓冲 ２ 犌犅 ／ 犜 ２１３１４ — ２００７ 溶液 （ ４．１１ ） 淋洗 ２ 次 ， 再用 １ｍＬ 超纯水淋洗 。 用 ３ｍＬ 乙腈洗脱 （ 速度控制在 １ｍＬ ／ ｍｉｎ ）。 将洗脱液 于 ４５℃ 下氮气吹干 ， 用 ０．０２５ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸盐缓冲溶液 （ ４．１２ ） 定容至 １ｍＬ ， 过 ０．４５ μ ｍ 滤膜后 ， 立即用 液相色谱  质谱 ／ 质谱仪测定 。 ７ ． ３ 　 测定 ７ ． ３ ． １ 　 液相色谱条件 ７ ． ３ ． １ ． １ 　 色谱柱 ： ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ １８ 柱 ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ （ 内径 ）， 粒度 ５ μ ｍ 。 ７ ． ３ ． １ ． ２ 　 流动相 ： Ａ 组分是 ０．０１ｍｏｌ ／ Ｌ 乙酸铵溶液 （ 甲酸调 ｐＨ 至 ４．５ ）； Ｂ 组分是乙腈 。 梯度洗脱程 序见表 １ 。 表 １ 　 梯度洗脱程序 步 　　 骤 时间 ／ ｍｉｎ 流速 ／（ ｍＬ ／ ｍｉｎ ） 组分 Ａ ／ ％ 组分 Ｂ ／ ％ １ ０．００ １．０ ９８．０ ２．０ ２ ３．００ １．０ ９８．０ ２．０ ３ ５．００ １．０ ９０．０ １０．０ ４ １５．００ １．０ ７０．０ ３０．０ ５ ２０．００ １．０ ９８．０ ２．０ ７ ． ３ ． １ ． ３ 　 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ 。 ７ ． ３ ． １ ． ４ 　 进样量 ： １００ μ Ｌ 。 ７ ． ３ ． ２ 　 质谱条件 ７ ． ３ ． ２ ． １ 　 离子源 ： 电喷雾离子源 。 ７ ． ３ ． ２ ． ２ 　 扫