书 书 书犐犆犛 ６７ ． １２０ 犡 ０４ 　 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２１３１１ — ２００７ 动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物 残留量检测方法 高效液相色谱 ／ 串联质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狉犲狊犻犱狌犲狊狅犳狀犻狋狉狅犳狌狉犪狀犿犲狋犪犫狅犾犻狋犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳 犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀 — 犎犘犔犆犕犛 ／ 犕犛犿犲狋犺狅犱 ２００７  １０  ２９ 发布 ２００８  ０４  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 、 附录 Ｃ 均为资料性附录 。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中国检验检疫科学研究院 、 中华人民共和国山东出入境检验检疫局 。 本标准主要起草人 ： 彭涛 、 李晓娟 、 国伟 、 孙利 、 林黎明 、 于静 、 邱月明 、 储晓刚 、 唐英章 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２１３１１ — ２００７ 动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物 残留量检测方法 高效液相色谱 ／ 串联质谱法 １ 　 范围 本标准规定了动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物 ３ 氨基 ２ 恶唑酮 （ ３ａｍｉｎｏ２ｏｘａｌｉｄｉｎｏｎｅ ， ＡＯＺ ）、 ５ 吗啉甲基 ３ 氨基 ２ 恶唑烷基酮 （ ５ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｍｅｔｈｙｌ３ａｍｉｎｏ２ｏｘａｌｉｄｉｎｏｎｅ ， ＡＭＯＺ ）、 １ 氨 基  乙内酰脲 （ １ａｍｉｎｏｈｙｄａｎｔｏｉｎ ， ＡＨＤ ） 和氨基脲 （ ｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅ ， ＳＥＭ ） 残留量的高效液相色谱 ／ 串联 质谱测定方法 。 本标准适用于肌肉 、 内脏 、 鱼 、 虾 、 蛋 、 奶 、 蜂蜜和肠衣中硝基呋喃类药物代谢物 ３ 氨基 ２ 恶唑酮 、 ５ 吗啉甲基 ３ 氨基 ２ 恶唑烷基酮 、 １ 氨基  乙内酰脲和氨基脲残留量的定性确证和定量测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — １９９２ ， ｎｅｑＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ） ３ 　 原理 样品经盐酸水解 ， 邻硝基苯甲醛过夜衍生 ， 调 ｐＨ 值 ７．４ 后 ， 用乙酸乙酯提取 ， 正己烷净化 。 分析物 采用高效液相色谱 ／ 串联质谱定性检测 ， 采用稳定同位素内标法进行定量测定 。 ４ 　 试剂和材料 除非另有说明 ， 所有试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ４ ． １ 　 甲醇 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ２ 　 乙腈 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ３ 　 乙酸乙酯 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ４ 　 正己烷 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ５ 　 浓盐酸 。 ４ ． ６ 　 氢氧化钠 。 ４ ． ７ 　 甲酸 ： 高效液相色谱级 。 ４ ． ８ 　 邻硝基苯甲醛 。 ４ ． ９ 　 三水磷酸钾 。 ４ ． １０ 　 乙酸铵 。 ４ ． １１ 　 ０．２ｍｏｌ ／ Ｌ 盐酸溶液 ： 准确量取 １７ｍＬ 浓盐酸 （ ４．５ ）， 用水定容至 １Ｌ 。 ４ ． １２ 　 ２．０ｍｏｌ ／ Ｌ 氢氧化钠溶液 ： 准确称取 ８０ｇ 氢氧化钠 （ ４．６ ）， 用水溶解并定容至 １Ｌ 。 ４ ． １３ 　 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 邻硝基苯甲醛溶液 ： 准确称取 １．５ｇ 邻硝基苯甲醛 （ ４．８ ）， 用甲醇溶解并定容至 １００ｍＬ 。 ４ ． １４ 　 ０．３ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸钾溶液 ： 准确称取 ７９．８９３ｇ 三水磷酸钾 （ ４．９ ）， 用水溶解并定容至 １Ｌ 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２１３１１ — ２００７ ４ ． １５ 　 乙腈饱和的正己烷 ： 量取正己烷 ８０ｍＬ 于 １００ｍＬ 分液漏斗中 ， 加入适量乙腈后 ， 剧烈振摇 ， 待分 配平衡后 ， 弃去乙腈层即得 。 ４ ． １６ 　 ０．１％ 甲酸水溶液 （ 含 ０．０００５ｍｏｌ ／ Ｌ 乙酸铵 ）： 准确量取 １ｍＬ 甲酸 （ ４．７ ） 和称取 ０．０３８６ｇ 乙酸 铵 （ ４．１０ ） 于 １Ｌ 容量瓶中 ， 用水定容至 １Ｌ 。 ４ ． １７ 　 标准物质 ： ３ 氨基 ２ 恶唑酮 、 ５ 吗啉甲基 ３ 氨基 ２ 恶唑烷基酮 、 １ 氨基  乙内酰脲 、 氨基 脲 ， 纯度 ≥ ９９％ 。 ４ ． １８ 　 内标物质 ： ３ 氨基 ２ 恶唑酮的内标物 ， Ｄ ４ ＡＯＺ ； ５ 吗啉甲基 ３ 氨基 ２ 恶唑烷基酮的内标物 ， Ｄ ５ ＡＭＯＺ ； １ 氨基  乙内酰脲的内标物 ， １３ ＣＡＨＤ ； 氨基脲的内标物 ， １３ Ｃ １５ ＮＳＥＭ ， 纯度 ≥ ９９％ 。 ４ ． １９ 　 标准储备液 ： 分别准确称取适量标准品 （ 精确至 ０．０００１ｇ ）， 用乙腈溶解 ， 配制成浓度为 １００ｍｇ ／ Ｌ 的标准储备溶液 ， －１８℃ 冷冻避光保存 ， 有效期 ３ 个月 。 ４ ． ２０ 　 混合中间标准溶液 ： 准确移取标准储备液 （ ４．１９ ） 各 １ｍＬ 于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用乙腈定容至刻 度 ， 配制成浓度为 １ｍｇ ／ Ｌ 的混合中间标准溶液 ， ４℃ 冷藏避光保存 ， 有效期 １ 个月 。 ４ ． ２１ 　 混合标准工作溶液 ： 准确移取 ０．１ｍＬ 混合中间标准溶液 （ ４．２０ ） 于 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用乙腈定容 至刻度 ， 配制成浓度为 ０．０１ｍｇ ／ Ｌ 的混合标准工作溶液 ， ４℃ 冷藏避光保存 ， 有效期 １ 周 。 ４ ． ２２ 　 内标储备液 ： 准确称取适量内标物质 （ 精确至 ０．０００１ｇ ）， 用乙腈溶解 ， 配制成浓度为 １００ｍｇ ／ Ｌ 的标准储备溶液 ， －１８℃ 冷冻避光保存 ， 有效期 ３ 个月 。 ４ ． ２３ 　 中间内标标准溶液 ： 准确移取 １ｍＬ 内标储备液 （ ４．２２ ） 于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用乙腈定容至刻度 ， 配制成浓度为 １ｍｇ ／ Ｌ 的中间内标标准溶液 ， ４℃ 冷藏避光保存 ， 有效期 １ 个月 。 ４ ． ２４ 　 混合内标标准溶液 ： 准确移取中间内标标准溶液 （ ４．２３ ） 各 ０．１ｍＬ 于 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用乙腈定 容至刻度 ， 配制成浓度为 ０．０１ｍｇ ／ Ｌ 的混合内标标准溶液 ， ４℃ 冷藏避光保存 ， 有效期 １ 周 。 ４ ． ２５ 　 微孔滤膜 ： ０．２０ μ ｍ ， 有机相 。 ４ ． ２６ 　 氮气 ： 纯度 ≥ ９９．９９９％ 。 ４ ． ２７ 　 氩气 ： 纯度 ≥ ９９．９９９％ 。 ５ 　 仪器和设备 ５ ． １ 　 液相色谱 ／ 串联质谱仪 ： 配备电喷雾离子源 （ ＥＳＩ ）。 ５ ． ２ 　 组织捣碎机 。 ５ ． ３ 　 分析天平 ： 感量 ０．０００１ｇ ， ０．０１ｇ 。 ５ ． ４ 　 均质器 ： １００００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ５ ． ５ 　 振荡器 。 ５ ． ６ 　 恒温箱 。 ５ ． ７ 　 ｐＨ 计 ： 测量精度 ±０．０２ｐＨ 单位 。 ５ ． ８ 　 离心机 ： １００００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ５ ． ９ 　 氮吹仪 。 ５ ． １０ 　 旋涡混合器 。 ５ ． １１ 　 容量瓶 ： １Ｌ ， １００ｍＬ ， １０ｍＬ 。 ５ ． １２ 　 具塞塑料离心管 ： ５０ｍＬ 。 ５ ． １３ 　 刻度试管 ： １０ｍＬ 。 ５ ． １４ 　 移液枪 ： ５ｍＬ ， １ｍＬ ， １００ μ Ｌ 。 ６ 　 试样制备与保存 ６ ． １ 　 肌肉 、 内脏 、 鱼和虾 从原始样品取出有代表性样品约 ５００ｇ ， 用组织捣碎机充分捣碎混匀 ， 均分成两份 ， 分别装入洁净容 ２ 犌犅 ／ 犜 ２１３１１ — ２００７ 器作为试样 ， 密封 ， 并标明标记 。 将试样置于 －１８℃ 冷冻避光保存 。 ６ ． ２ 　 肠衣 从原始样品取出有代表性样品约 １００ｇ ， 用剪刀剪成边长 ＜ ５ｍｍ 的方块 ， 混匀后均分成两份 ， 分别 装入洁净容器作为试样 ， 密封 ， 并标明标记 。 将试样置于 －１８℃ 冷冻避光保存 。 ６ ． ３ 　 蛋 从原始样品取出有代表性样品约 ５００ｇ ， 去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀 ， 均分成两份 ， 分别装入 洁净容器作为试样 ， 密封 ， 并标明标记 。 将试样置于 ４℃ 冷藏避光保存 。 ６ ． ４ 　 奶和蜂蜜 从原始样品取出有代表性样品约 ５００ｇ ， 用组织捣碎机充分混匀 ， 均分成两份 ， 分别装入洁净容器作 为试样 ， 密封 ， 并标明标记 。 将试样置于 ４℃ 冷藏避光保存 。 　　 注 ： 在制样的操作过程中 ， 应防止样品污染或残留物含量发生变化 。 ７ 　 样品处理 ７ ． １ 　 水解和衍生化 ７ ． １ ． １ 　 肌肉 、 内脏 、 鱼 、 虾和肠衣 称取约 ２ｇ 试样 （ 精确至 ０．０１ｇ ） 于 ５０ｍＬ 塑料离心管中 ， 加入 １０ｍＬ