书 书 书犐犆犛 ６５ ． ０２０ ． ３０ 犅 ４４ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １４９２７ ． １ — ２００８ 代替 ＧＢ ／ Ｔ１４９２７．１ — ２００１ 实验动物 　 近交系小鼠 、 大鼠生化标记检测法 犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔犃狀犻犿犪犾狊 — 犕犲狋犺狅犱狊犳狅狉犫犻狅犮犺犲犿犻犮犪犾犿犪狉犽犲狉狊狅犳犻狀犫狉犲犱犿犻犮犲犪狀犱狉犪狋狊 　　 ２００８  １２  １０ 发布 ２００９  ０３  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 ＧＢ ／ Ｔ１４９２７ 共分 ２ 个部分 ： ——— 第 １ 部分为 《 实验动物 　 近交系小鼠 、 大鼠生化标记检测法 》； ——— 第 ２ 部分为 《 实验动物 　 近交系小鼠 、 大鼠免疫标记检测法 》。 本部分为 ＧＢ ／ Ｔ１４９２７ 的第 １ 部分 。 本部分自实施之日起代替 ＧＢ ／ Ｔ１４９２７．１ — ２００１ 《 实验动物 　 近交系小鼠 、 大鼠生化标记检测 方法 》。 本部分与 ＧＢ ／ Ｔ１４９２７．１ — ２００１ 相比主要技术差异如下 ： ａ ） 　 在近交系小鼠 、 大鼠生化标记检测方法中的电泳结果模式图基础上 ， 增加电泳图谱 ； ｂ ） 　 调整了近交系小鼠 、 大鼠生化标记检测方法中的部分生化位点 ， 小鼠增加了肽酶 ３ （ ｐｅｐ３ ） 位 点 ， 大鼠增补血清碱性磷酸酶 （ Ａｌｐ ） 和血红蛋白 （ Ｈｂｂ ） 两个生化位点 ； ｃ ） 　 对部分溶液配方进行调整 。 本部分的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 、 附录 Ｃ 和附录 Ｄ 为资料性附录 。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口 。 本部分起草单位 ： 全国实验动物标准化技术委员会 。 本部分主要起草人 ： 邢瑞昌 、 刘双环 、 岳秉飞 、 鲍世民 、 张连峰 。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１４９２７．１ — １９９４ ， ＧＢ ／ Ｔ１４９２７．１ — ２００１ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １４９２７ ． １ — ２００８ 实验动物 　 近交系小鼠 、 大鼠生化标记检测法 １ 　 范围 ＧＢ ／ Ｔ１４９２７ 的本部分规定了对近交系小鼠 、 大鼠生化标记进行检测的醋酸纤维膜 （ 板 、 硬膜 ） 的电 泳方法及判断标准 。 本部分适用于近交系小鼠和大鼠任何品系 。 ２ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于 ＧＢ ／ Ｔ１４９２７ 的本部分 。 ２ ． １ 　 生化标记 　 犫犻狅犮犺犲犿犻犮犪犾犿犪狉犽犲狉 表明遗传特征并采用生化方法识别的记号 。 在小 、 大鼠中多为一些同工酶和异构蛋白 。 ２ ． ２ 　 生化遗传概貌 　 犫犻狅犮犺犲犿犻犮犪犾犵犲狀犲狋犻犮狆狉狅犳犻犾犲 各种近交系多个生化遗传标记表型资料的汇总 ， 从一定程度上反应了各种品系的遗传特征 。 ２ ． ３ 　 纯合性 　 犺狅犿狅狕狔犵狅狊犻狋狔 同源染色体的相对位置上具有相同基因的状态 。 近交系动物通过连续的近亲交配绝大部分的位点 都具有纯合性 。 一个品系内任何个体间进行交配产生的后代也具有纯合性 。 ２ ． ４ 　 同基因性 　 犻狊狅犵犲狀犻犮犻狋狔 一个近交品系中所有个体在遗传上是同源的 。 因此在同一品系内任何个体间进行皮肤和肿瘤移植 不被当作异己而受到排斥 。 如对近交系动物的基因进行检测 ， 一个品系内不同个体的基因型完全一致 。 ２ ． ５ 　 个体性 　 犻狀犱犻狏犻犱狌犪犾犻狋狔 就整个近交系动物而言 ， 每个品系在遗传上都是独特的 ， 表现在相当广泛的特性上 ， 如生化遗传概 貌等 。 大多数近交品系可通过各自的生化遗传概貌相互区别 。 ３ 　 方法原理 在小鼠和大鼠体内存在着一些同工酶和同种异构蛋白 。 可依据它们在特定电场内携带的电荷不同 采用电泳的方法将它们区分 ， 并根据电泳带型即蛋白质的表现型推断其基因型 ， 建立各种近交系的遗传 概貌 ， 定期对它们进行质量监测 。 ４ 　 设备和材料 ４ ． １ 　 常压电泳仪 （ ０ ～ ６００Ｖ ）。 ４ ． ２ 　 醋酸纤维素膜 （ 板 、 硬膜 ） 电泳槽 。 ４ ． ３ 　 电泳点样装置 。 ４ ． ４ 　 醋酸纤维素膜 （ ７ｃｍ×９ｃｍ ）。 １ 犌犅 ／ 犜 １４９２７ ． １ — ２００８ ４ ． ５ 　 醋酸纤维素板 （ ６ｃｍ×８ｃｍ ）。 ４ ． ６ 　 醋酸纤维素硬膜 （ ７ｃｍ×９ｃｍ ）。 ４ ． ７ 　 ４℃ 冰箱 。 ４ ． ８ 　 －２０℃ 或 －４０℃ 冰箱 。 ４ ． ９ 　 ４℃ 低温高速离心机 。 ４ ． １０ 　 振荡仪 。 ４ ． １１ 　 组织匀浆机 （ ２ｍＬ 或 ５ｍＬ ）。 ４ ． １２ 　 抗凝毛细管 。 ４ ． １３ 　 抗凝毛细管塞子 。 ４ ． １４ 　 毛细管离心机 。 ４ ． １５ 　 吸耳球 。 ４ ． １６ 　 小砂轮 。 ４ ． １７ 　 解剖板 。 ４ ． １８ 　 手术剪 ， 手术镊 。 ４ ． １９ 　 竹镊子 。 ４ ． ２０ 　 微波炉 。 ４ ． ２１ 　 ３７℃ 温箱 。 ４ ． ２２ 　 玻璃器皿 。 ４ ． ２３ 　 ６ｃｍ×８ｃｍ 或 ７ｃｍ×９ｃｍ 玻璃板 。 ４ ． ２４ 　 普通滤纸 。 ４ ． ２５ 　 分析天平 。 ４ ． ２６ 　 ｐＨ 计 。 ４ ． ２７ 　 紫外监测仪 。 ４ ． ２８ 　 实验室常规用品 。 ４ ． ２９ 　 化学试剂 ： 见表 １ 。 表 １ 　 化学试剂 中文名称 英文名称 （ 或简写 ） 分子式 规 　　 格 三羟甲基氨基甲烷 Ｔｒｉｓ Ｃ ４ Ｈ １１ ＮＯ ３ 分析纯或化学纯 乙二胺四乙酸 ＥＤＴＡ Ｃ １０ Ｈ １６ Ｎ ２ Ｏ ８ 分析纯或化学纯 硼酸 ｂｏｒｉｃａｃｉｄ Ｈ ３ ＢＯ ３ 分析纯或化学纯 甘氨酸 ｇｌｙｃｉｎｅ Ｃ ２ Ｈ ５ ＮＯ ２ 分析纯或化学纯 盐酸 ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄ ＨＣｌ 分析纯或化学纯 双氧水 ｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅ３０％ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｈ ２ Ｏ ２ 分析纯或化学纯 柠檬酸 ｃｉｔｒａｔｅａｃｉｄｍｏｎｏｈｕｄｒａｔｅ Ｃ ６ Ｈ ８ Ｏ ７ · Ｈ ２ Ｏ 分析纯或化学纯 磷酸氢二钠 ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｉｂａｓｉｃ Ｎａ ２ ＨＰＯ ４ · １２Ｈ ２ Ｏ 分析纯或化学纯 磷酸二氢钾 ｐｏｔａｓｓｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ ＫＨ ２ ＰＯ ４ 分析纯或化学纯 氢氧化钠 ｓｏｄｉｕｍｈｙｄｒｏｘｉｄｅ ＮａＯＨ 分析纯或化学纯 无水醋酸钠 ｏｄｉｕｍａｃｅｔａｔｅａｎｈｙｄｒｏｕｓ ＮａＣ ２ Ｈ ３ Ｏ ２ 分析纯或化学纯 琼脂粉 ａｇａｒ — 分析纯或化学纯 醋酸镁 ｍａｇｎｅｓｉｕｍａｃｅｔａｔｅ Ｍｇ （ Ｃ ２ Ｈ ２ Ｏ ２ ） ２ 分析纯或化学纯 ２ 犌犅 ／ 犜 １４９２７ ． １ — ２００８ 表 １ （ 续 ） 中文名称 英文名称 （ 或简写 ） 分子式 规 　　 格 氯化锰 ｍａｎｇａｎｅｓｅｃｈｌｏｒｉｄｅ ＭｎＣｌ ２ 分析纯 丽春红 Ｓ ｐｏｎｃｅａｕＳ Ｃ ２２ Ｈ １２ Ｎ ４ Ｎａ ４ Ｏ １３ Ｓ ４ 分析纯 三氯乙酸 ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃａｃｉｄ ＣＣｌ ３ ＣＯＯＨ 分析纯或化学纯 磺基水杨酸 ｓａｌｆｏｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄ Ｃ ７ Ｈ ６ Ｏ ６ Ｓ · ２Ｈ ２ Ｏ 分析纯或化学纯 巴比妥 ｂａｒｂｉｔａｌ Ｃ ８ Ｈ １２ Ｎ ２ Ｏ ３ 分析纯或化学纯 巴比妥钠 ｓｏｄｉｕｍｂａｒｂｉｔａｌ Ｃ ８ Ｈ １２ Ｎ ２ ＮａＯ ３ 分析纯或化学纯 氯化镁 ｍａｇｎｅｓｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ ＭｇＣｌ ２ · ６Ｈ ２ Ｏ 分析纯或化学纯 乙二胺四乙酸二钠 Ｎａ ２ ＥＤＴＡ Ｃ １０ Ｈ １４ Ｎ ２ Ｎａ ２ Ｏ 分析纯或化学纯 三氯化铁 ｆｅｒｒｉｃｃｈｌｏｒｉｄｅａｎｈｙｄｒｏｕｓ ＦｅＣｌ ３ 分析纯或化学纯 铁氰化钾 ｆｅｒｒｉｃｙａｎｎｔｕｍｋａｌｉｕｍ Ｋ ３ ［ Ｆｅ （ ＣＮ ） ６ ］ 分析纯或化学纯 氢氧化铵 ａｍｍｏｎｉｕｍｈｙｄｒｏｘｉｄｅ ＮＨ ４ ＯＨ 分析纯或化学纯 醋酸 ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ ＣＨ ３ ＣＯＯＨ 分析纯或化学纯 丙酮 ａｃｅｔｏｎｅ ＣＨ ３ ＣＯＣＨ ２ 分析纯或化学纯 葡萄糖 １ 磷酸 ｇｌｕｃｏｓｅ１ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｃ ６ Ｈ １１ Ｏ ９ ＰＮａ ２ 胱胺盐酸盐 ｃｙｓｔａｍｉｎｅｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ Ｃ ４ Ｈ １４ Ｃｌ ２ Ｎ ２ Ｓ ２ 二硫苏糖醇 １ ， ４ｄｉｔｈｉｏｈｒｅｉｔｏｌ （ ＤＴＴ ） Ｃ ４ Ｈ １０ Ｏ ２ Ｓ ４ 甲基散形乙酸盐 ４ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙａｃｅｔａｔｅ Ｃ １０ Ｈ ８ Ｏ ３ β  乙酸萘酯 β ｎａｐｈｔｈｙｌａｃｅｔｔｅ Ｃ １２ Ｈ １０ Ｏ ２ β  磷酸萘酯钠盐 β ｎａｐｈｔｈｙｌａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｃ １０ Ｈ ８ Ｏ ４ ＰＮａ β  磷酸萘酚二钠盐 β ｎａｐｈｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｉｓｏｄｉｕｍｓａｌｔ Ｃ １０ Ｈ ７ Ｏ ４ ＰＮａ ２ Ｄ 果糖 ６ 磷酸 Ｄｆｒｕｃｔｏｓｅ６ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｉｓｏｄｉｕｍｓａｌｔ Ｃ ６ Ｈ １１ Ｏ ９ Ｎａ ２ Ｐ 溴化甲基噻唑蓝 ｔｈｉａｚｏｌｙｌｂｌｕｅｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉ