书 书 书犐犆犛 ６５ ． ０２０ ． ３０ 犅 ４４ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １４９２６ ． ５８ — ２００８ 代替 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．５８ — ２００１ 实验动物 　 传染性犬肝炎病毒检测方法 犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔犪狀犻犿犪犾 — 犕犲狋犺狅犱犳狅狉犲狓犪犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳 犐狀犳犲犮狋犻狅狌狊犮犪狀犻狀犲犺犲狆犪狋犻狋犻狊狏犻狉狌狊 ２００８  １２  ０３ 发布 ２００９  ０３  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６ 《 实验动物 》 共 ５４ 个部分 ， 为不同微生物和病毒检测技术方法 。 本部分自实施之日起代替 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．５８ — ２００１ 《 实验动物 　 传染性犬肝炎病毒检测方法 》。 本部分与 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．５８ — ２００１ 相比主要技术差异如下 ： ａ ） 　 传染性犬肝炎是犬的主要烈性传染病之一 ， 在我国犬群中广泛流行 ， 是基础级犬和 ＳＰＦ 犬的 必检项目 ； ｂ ） 　 “ ６ 　 结果判定 ” 中增加了 “ ６．３ 　 基础级犬群体免疫抗体合格率 ： 免疫抗体合格率 ＝ （ 被检动物 抗体阳性数 ／ 被检动物总数 ） ×１００％ 。 基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于 ７０％ 以上可判 为该犬群免疫合格 ” 内容 。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口 。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草 。 本部分主要起草人 ： 田克恭 、 贺争鸣 、 范薇 。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．５８ — ２００１ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １４９２６ ． ５８ — ２００８ 实验动物 　 传染性犬肝炎病毒检测方法 １ 　 范围 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６ 的本部分规定了传染性犬肝炎病毒 （ ＩＣＨＶ ） 的检测方法 、 试剂等 。 本部分适用于犬 ＩＣＨＶ 的检测 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６ 的本部分的引用而成为本部分的条款 。 凡是注日期的引用文 件 ， 其随后所有的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本部分 ， 然而 ， 鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本 部分 。 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．５０ 　 实验动物 　 酶联免疫吸附试验 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．５４ 　 实验动物 　 血凝抑制试验 ３ 　 原理 根据免疫学原理 ， 采用 ＩＣＨＶ 抗原检测犬血清中 ＩＣＨＶ 抗体 ； 或根据 ＩＣＨＶ 在一定的条件下 ， 能凝 集人 “ Ｏ ” 型红细胞 ， 这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理 ， 检测犬血清中 ＩＣＨＶ 抗体 。 ４ 　 主要试剂和器材 ４ ． １ 　 试剂 ４ ． １ ． １ 　 ＥＬＩＳＡ 抗原 ４ ． １ ． １ ． １ 　 特异性抗原 用 ＩＣＨＶ 感染 ＭＤＣＫ 细胞 ， 接种 ３ｄ ～ ４ｄ 后 ， 当病变达 ＋＋＋ ～ ＋＋＋＋ （ － 阴性 ； ＋ 轻 ； ＋＋ 中 ； ＋＋＋ 重 ； ＋＋＋＋ 严重 ， 下同 ） 时收获 。 冻融三次或超声波处理后 ， 低速离心去除细胞碎片 ， 上清液再 经超速离心浓缩后制成 ＥＬＩＳＡ 抗原 。 ４ ． １ ． １ ． ２ 　 正常抗原 ＭＤＣＫ 细胞冻融破碎后 ， 经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液 。 ４ ． １ ． ２ 　 血凝素 ＩＣＨＶ 接种 ＭＤＣＫ 细胞 ， 培养 ３ｄ ～ ４ｄ ， 当病变达 ＋＋＋ ～ ＋＋＋＋ 时收获培养物 。 冻融三次或 超声波处理后 ， 低速离心去除细胞碎片 ， 上清液分装后低温保存 。 ４ ． １ ． ３ 　 阳性血清 ＩＣＨＶ 实验感染或自然感染的犬血清 。 ４ ． １ ． ４ 　 阴性血清 无 ＩＣＨＶ 感染 、 未经免疫的犬血清 。 ４ ． １ ． ５ 　 酶结合物 辣根过氧化物酶标记羊或兔抗犬 ＩｇＧ 抗体 。 ４ ． １ ． ６ 　 人 “ Ｏ ” 型红细胞 。 ４ ． ２ 　 器材 ４ ． ２ ． １ 　 酶标仪 。 ４ ． ２ ． ２ 　 ３７℃ 培养箱或水浴箱 。 １ 犌犅 ／ 犜 １４９２６ ． ５８ — ２００８ ５ 　 检测方法 ５ ． １ 　 采用 ＥＬＩＳＡ 方法 （ 见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．５０ ） 进行血清学检测 。 ５ ． ２ 　 采用 ＨＡＩ 方法 （ 见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．５４ ） 进行血清学检测 。 ６ 　 结果判定 ６ ． １ 　 基础级犬 ， 接种疫苗后 ， 经 ＥＬＩＳＡ 检测抗体效价大于等于 １∶１６０ ， 或 ＨＡＩ 检测抗体效价大于等 于 １∶１６ 判为合格 。 ６ ． ２ 　 ＳＰＦ 级犬 ， 不应进行疫苗接种 ， 对阳性检测结果 ， 选用同一种方法或另一种方法重试 ， 如为阳性则 判为阳性 。 ６ ． ３ 　 基础级犬群体免疫抗体合格率 ： 免疫抗体合格率 ＝ （ 被检动物抗体阳性数 ／ 被检动物总数 ） ×１００％ 基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于 ７０％ 以上可判为该犬群免疫合格 。 ７ 　 结果报告 根据判定结果 ， 作出报告 。 ２ 犌犅 ／ 犜 １４９２６ ． ５８ — ２００８ 书 书 书 ８００２ — ８５ ． ６２９４１ 犜 ／ 犅犌 中华人民共和国 国家标准 实验动物 　 传染性犬肝炎病毒检测方法 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．５８ — ２００８  中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街 １６ 号 邮政编码 ： １０００４５ 网址 ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ 电话 ： ６８５２３９４６ 　 ６８５１７５４８ 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销  开本 ８８０×１２３０１ ／ １６ 　 印张 ０．５ 　 字数 ４ 千字 ２００９ 年 ２ 月第一版 　 ２００９ 年 ２ 月第一次印刷  书号 ： １５５０６６ · １３５７７０ 如有印装差错 　 由本社发行中心调换 版权专有 　 侵权必究 举报电话 ：（ ０１０ ） ６８５３３５３３