书 书 书犐犆犛 ６５ ． ０２０ ． ３０ 犅 ４４ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １４９２６ ． ４７ — ２００８ 代替 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４７ — ２００１ 实验动物 　 志贺菌检测方法 犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔犪狀犻犿犪犾 — 犕犲狋犺狅犱犳狅狉犲狓犪犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳 犛犺犻犵犲犾犾犪 狊狆狆． ２００８  １２  ０３ 发布 ２００９  ０３  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６ 《 实验动物 》 共 ５４ 个部分 ， 为不同微生物和病毒检测技术方法 。 本部分自实施之日起代替 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４７ — ２００１ 《 实验动物 　 志贺菌检测方法 》。 本部分与 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４７ — ２００１ 相比主要技术差异如下 ： ａ ） 　 对 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４７ — ２００１ 《 实验动物 　 志贺菌检测方法 》 部分内容进行了修订和增加 ； ｂ ） 　 在原标准 “ ５ 培养基及试剂 ” 中增加了 “ ５．２ＧＮ 增菌液 ”， 将原标准中 “ ５．３Ｓ．Ｓ 琼脂 ” 修改为 “ ５．４ＸＬＤ 琼脂 ”； ｃ ） 　 在原标准 “ ６ 检测程序 ” 中增加了 “ ＧＮ 增菌液 （ ３６±１ ） ℃ 培养 ６ｈ ～ ８ｈ ” 这一程序 ； ｄ ） 　 在原标准 “ ６ 检测程序 ” 中将 “ Ｓ．Ｓ 琼脂 ” 修改为 “ ＸＬＤ 琼脂 ”； ｅ ） 　 原标准 “ ７．２ 分离培养将已接种的麦康凯琼脂和 Ｓ．Ｓ 琼脂平皿置 （ ３６±１ ） ℃ 培养 １８ ～ ２４ｈ 。” 修 改为 “ ７．２ 增菌分离培养将已接种的 ＧＮ 增菌液置 （ ３６±１ ） ℃ 培养 ６ｈ ～ ８ｈ ， 转种麦康凯琼脂 和 ＸＬＤ 琼脂平皿 ， 置 （ ３６±１ ） ℃ 培养 １８ｈ ～ ２４ｈ ”； ｆ ） 　 原标准 “ ７．３．１ 菌落特征志贺菌在麦康凯和 Ｓ．Ｓ 琼脂平皿上形成无色透明 、 圆形 、 扁平或微凸 起 ， 光滑湿润 ， 边缘整齐 ， 直径约 ２ｍｍ 的菌落 。 宋内氏志贺菌菌落一般较大 ， 半透明 ， 有时可 出现扁平 ， 边缘不整齐的粗糙型菌落 。” 修改为 “ ７．３．１ 菌落特征志贺菌在麦康凯琼脂平皿上 形成无色 、 凸起 、 直径 ２ｍｍ ～ ３ｍｍ 的菌落 。 在 ＸＬＤ 琼脂平皿形成红色 、 光滑 、 直径 １ｍｍ ～ ２ｍｍ 的菌落 。 痢疾志贺氏菌 １ 型在上述两种培养基上形成的菌落较其他志贺菌属菌落 要小 ”； ｇ ） 　 原标准 “ ７．３．５ 表 １ 志贺菌生化反应 ” 中 “ 七叶苷脱羧酶 ” 修改成 “ 七叶苷 ”。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口 。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草 。 本部分主要起草人 ： 黄韧 。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４７ — ２００１ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １４９２６ ． ４７ — ２００８ 实验动物 　 志贺菌检测方法 １ 　 范围 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６ 的本部分规定了实验动物志贺菌的检测方法 。 本部分适用于猴志贺菌的检测 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６ 的本部分的引用而成为本部分的条款 。 凡是注日期的引用文 件 ， 其随后所有的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本部分 ， 然而 ， 鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本 部分 。 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４２ 　 实验动物 　 细菌学检测 　 标本采集 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 　 实验动物 　 细菌学检测 　 染色法 、 培养基和试剂 ３ 　 原理 志贺菌是革兰氏阴性短杆菌 ， 在三糖铁或双糖铁等培养基上具有特定的生长和生化特征 。 因此 ， 可 通过选择性培养基培养 、 生化和血清试验鉴定志贺菌 。 ４ 　 主要设备和材料 普通恒温培养箱 。 ５ 　 培养基及试剂 ５ ． １ 　 ＣａｒｙＢｌａｉｒ 运送培养基 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． ２ 　 ＧＮ 增菌液 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． ３ 　 麦康凯琼脂 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． ４ 　 ＸＬＤ 琼脂 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． ５ 　 克氏双糖铁琼脂 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． ６ 　 三糖铁琼脂 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． ７ 　 西蒙氏柠檬酸盐培养基 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． ８ 　 氨基酸脱羧酶试验培养基 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． ９ 　 尿素琼脂 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． １０ 　 半固体琼脂 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． １１ 　 糖发酵培养基 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． １２ 　 氰化钾生长培养基 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． １３ 　 葡萄糖铵培养基 ： 成分及配制方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４３ 。 ５ ． １４ 　 志贺菌多价诊断血清 。 １ 犌犅 ／ 犜 １４９２６ ． ４７ — ２００８ ６ 　 检测程序 图 １ 　 检测程序 ７ 　 操作步骤 ７ ． １ 　 采样 采取粪便或肛拭子标本 ， 采样方法见 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４２ 。 ７ ． ２ 　 增菌分离培养 将已接种的 ＧＮ 增菌液置 （ ３６±１ ） ℃ 培养 ６ｈ ～ ８ｈ ， 转种麦康凯琼脂和 ＸＬＤ 琼脂平皿 ， 置 （ ３６± １ ） ℃ 培养 １８ｈ ～ ２４ｈ 。 ７ ． ３ 　 鉴定 ７ ． ３ ． １ 　 菌落特征 志贺菌在麦康凯琼脂平皿上形成无色 、 凸起 、 直径 ２ｍｍ ～ ３ｍｍ 的菌落 。 在 ＸＬＤ 琼脂平皿形成红 色 、 光滑 、 直径 １ｍｍ ～ ２ｍｍ 的菌落 。 痢疾志贺氏菌 １ 型在上述两种培养基上形成的菌落较其他志贺 菌属菌落要小 。 ７ ． ３ ． ２ 　 菌体特征 革兰氏阴性小杆菌 ， 无鞭毛 ， 无芽孢 。 ７ ． ３ ． ３ 　 培养特性 本菌接种克氏双糖铁或三糖铁琼脂 ，（ ３６±１ ） ℃ 培养 １８ｈ ～ ２４ｈ 后 ， 斜面不产酸 ， 底层产酸不产气 ， 硫化氢阴性 。 ２ 犌犅 ／ 犜 １４９２６ ． ４７ — ２００８ ７ ． ３ ． ４ 　 动力半固体试验 阴性 。 ７ ． ３ ． ５ 　 本菌生化特征 见表 １ 。 表 １ 　 志贺菌生化反应 生化检测项目 判定结果 葡萄糖铵 — 七叶苷 — 鸟氨酸脱羧酶 ａ — ＫＣＮ 生长 — 生化检测项目 判定结果 赖氨酸脱羧酶 — 尿素 — 西蒙氏柠檬酸盐 — 水杨苷 — 　　 注 ：“ ＋ ” 表示阳性 ，“ － ” 表示阴性 。 　　 ａ Ｃ 群 １３ 型和 Ｄ 群为阳性 。 ７ ． ３ ． ６ 　 血清玻片凝集试验阳性 。 ８ 　 结果报告 凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告 ， 不符合者作出阴性报告 。 生化反应不符合的菌株 ， 即使 能与某种志贺菌分型血清发生凝集 ， 仍不得判定为志贺菌属的培养物 。 犌犅 ／ 犜 １４９２６ ． ４７ — ２００８ 书 书 书 ８００２ — ７４  ６２９４１ 犜 ／ 犅犌 中华人民共和国 国家标准 实验动物 　 志贺菌检测方法 ＧＢ ／ Ｔ１４９２６．４７ — ２００８  中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街 １６ 号 邮政编码 ： １０００４５ 网址 ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ 电话 ： ６８５２３９４６ 　 ６８５１７５４８ 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销  开本 ８８０×１２３０１ ／ １６ 　 印张 ０．５ 　 字数 ８ 千字 ２００９ 年 ２ 月第一版 　 ２００９ 年 ２ 月第一次印刷  书号 ： １５５０６６ · １３５７７５ 如有印装差错 　 由本社发行中心调换 版权专有 　 侵权必究 举报电话 ：（ ０１０ ） ６８５３３５３３